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琼脂糖凝胶成像秘籍：拍出完美凝胶图的超实用技巧
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做生物实验，琼脂糖凝胶电泳是不是家常便饭？但为啥你的凝胶图像总是模糊、条带拖尾，而别人的却清晰又漂亮呢？今天就来给大家揭秘，如何获得完美的琼脂糖凝胶图像，让你的实验结果“美美哒”！ 选对缓冲液，成功第一步 缓冲液可是影响凝胶图像的关键因素哦！常用的有TAE（Tris-Acetate-EDTA）和TBE（Tris-Borate-EDTA）。TAE更适合较大的DNA片段，条带清晰；TBE则适合较小的DNA片段，分辨率更高。要是做长时间电泳，TBE的缓冲能力强，效果更好。但要注意，TBE里的硼酸盐会抑制酶活性，如果后续还要用DNA做别的实验，比如酶切，那还是选TAE更保险。TAE的储备液放得久也不容易坏，TBE的储备液时间长了会沉淀，用的时候要注意。总之，根据实验需求选对缓冲液，成功就迈出了第一步。 新鲜缓冲液，清晰图像的保障 别偷懒，每次电泳都用新鲜的缓冲液！新鲜的缓冲液能让凝胶图像更清晰、更均匀。虽然准备新的缓冲液麻烦点，但和重新跑一次凝胶比起来，这点麻烦算啥呢？用新鲜缓冲液，你的凝胶图像质量会明显提升，让你的实验结果更有说服力。 足够的电泳时间，条带更清晰 跑凝胶可不能急躁哦！给凝胶足够的时间跑，条带才会清晰又均匀。建议在75V以下跑凝胶，这样缓冲液不会过热。要是缓冲液温度过高，条带就会拖尾、不均匀。可以在电泳前把缓冲液和凝胶冷却一下，或者把凝胶放在冷藏室里跑，这样能避免过热。对于大凝胶，要注意中心和边缘的温度差异，保持恒定的电压（50V至75V左右）很重要。耐心一点，让凝胶慢慢跑，你的条带才会又直又清晰。 凝胶浓度，根据片段大小来调整 别小看凝胶浓度的选择，这可是影响条带分离的关键哦！对于较小的DNA片段（小于1kb），用2%的琼脂糖凝胶，条带分离效果超好；对于较大的片段（大于10kb），1%的凝胶更适合，这样条带才不会挤在一起。根据你的DNA片段大小，调整凝胶浓度，让你的条带清晰又美观。 染料选择，让条带更显眼 染料也很重要哦！常用的有溴化乙锭（EB）和GelRed。EB染色效果好，但有毒，操作要小心；GelRed更安全，染色效果也不错。根据你的实验需求和实验室条件，选择合适的染料，让你的条带在图像上更显眼。 加样量，适中才好 加样量可不是越多越好哦！加样量太多，条带会挤在一起，影响分离效果；加样量太少，条带又太淡，看不清楚。一般来说，对于PCR产物，20-30μL的加样量比较合适；对于质粒DNA，10-15μL就足够了。根据你的样本类型，调整加样量，让你的条带清晰又美观。 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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