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[交流]
体外消化模拟实验方案
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人体体外肠胃消化模拟实验方案。 一、实验目的 模拟人体口腔、胃和小肠的消化过程，评估样品（如食品、药物、益生菌等）在消化过程中的物理化学变化、活性成分释放率、生物利用率或微生物存活率。 二、实验材料 1. 试剂 口腔阶段 α-淀粉酶（ph 6.9） 人工唾液电解质液（含kcl、nacl、cacl₂等） 胃阶段 胃蛋白酶（ph 3.0） 人工胃液（含nacl、kcl等） 小肠阶段 胰酶（胰蛋白酶、糜蛋白酶等，ph 7.0） 胆盐（如牛胆酸钠） 人工肠液（含nahco₃调节ph） 其他 pbs缓冲液、naoh/hcl（调节ph）、抗氧化剂（如抗坏血酸，可选） 2. 设备 人体体外肠胃消化模拟设备: jd-shime-i 三、实验步骤 1. 口腔阶段模拟 条件：37℃，ph 6.9，时间2-5分钟 操作： 将样品（固体需粉碎至2 mm颗粒）与人工唾液按混合。 加入α-淀粉酶，混匀混合。 模拟咀嚼运动。 终止反应：快速调节ph至3.0（进入胃阶段）或离心取上清液（仅分析口腔阶段）。 2. 胃阶段模拟 条件：37℃，ph 3.0，时间2小时 操作： 将口腔消化产物与人工胃液按混合。 加入胃蛋白酶，调节ph至3.0。 模拟胃蠕动。 取样：在0、30、60、120分钟取样，立即煮沸5分钟灭活酶（或调节ph至7.0终止反应）或使用jd-shime-i自动分析功能。 3. 小肠阶段模拟 条件：37℃，ph 7.0，时间2-4小时 操作： 将胃消化产物与人工肠液按混合。 加入胰酶和胆盐，调节ph至7.0。 模拟肠道蠕动。 取样：在0、60、120、240分钟取样，离心（10,000 g，10分钟）取上清液分析或使用jd-shime-i自动分析功能。 四、关键参数控制 ph调节：精确控制各阶段ph。 酶活性验证：定期检测酶活性。 氧控制：厌氧环境可模拟肠道厌氧条件（针对益生菌实验）。 五、数据分析 检测指标（根据实验目标选择） 理化性质：粒径（动态光散射）、zeta电位、黏度。 成分释放率：hplc/uplc检测目标成分（如多酚、药物活性成分）。 微生物存活率：平板计数法（益生菌）、荧光染色（活/死细胞区分）。 消化产物：sds-page分析蛋白质水解程度；dns法测还原糖释放量。 [ last edited by 小冀- on 2025-5-8 at 09:08 ] [ Last edited by 小冀- on 2025-5-8 at 09:08 ] |
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