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[交流]
体外消化模拟实验方案
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人体体外肠胃消化模拟实验方案。 一、实验目的 模拟人体口腔、胃和小肠的消化过程,评估样品(如食品、药物、益生菌等)在消化过程中的物理化学变化、活性成分释放率、生物利用率或微生物存活率。 二、实验材料 1. 试剂 口腔阶段 α-淀粉酶(ph 6.9) 人工唾液电解质液(含kcl、nacl、cacl₂等) 胃阶段 胃蛋白酶(ph 3.0) 人工胃液(含nacl、kcl等) 小肠阶段 胰酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶等,ph 7.0) 胆盐(如牛胆酸钠) 人工肠液(含nahco₃调节ph) 其他 pbs缓冲液、naoh/hcl(调节ph)、抗氧化剂(如抗坏血酸,可选) 2. 设备 人体体外肠胃消化模拟设备: jd-shime-i 三、实验步骤 1. 口腔阶段模拟 条件:37℃,ph 6.9,时间2-5分钟 操作: 将样品(固体需粉碎至2 mm颗粒)与人工唾液按混合。 加入α-淀粉酶,混匀混合。 模拟咀嚼运动。 终止反应:快速调节ph至3.0(进入胃阶段)或离心取上清液(仅分析口腔阶段)。 2. 胃阶段模拟 条件:37℃,ph 3.0,时间2小时 操作: 将口腔消化产物与人工胃液按混合。 加入胃蛋白酶,调节ph至3.0。 模拟胃蠕动。 取样:在0、30、60、120分钟取样,立即煮沸5分钟灭活酶(或调节ph至7.0终止反应)或使用jd-shime-i自动分析功能。 3. 小肠阶段模拟 条件:37℃,ph 7.0,时间2-4小时 操作: 将胃消化产物与人工肠液按混合。 加入胰酶和胆盐,调节ph至7.0。 模拟肠道蠕动。 取样:在0、60、120、240分钟取样,离心(10,000 g,10分钟)取上清液分析或使用jd-shime-i自动分析功能。 四、关键参数控制 ph调节:精确控制各阶段ph。 酶活性验证:定期检测酶活性。 氧控制:厌氧环境可模拟肠道厌氧条件(针对益生菌实验)。 五、数据分析 检测指标(根据实验目标选择) 理化性质:粒径(动态光散射)、zeta电位、黏度。 成分释放率:hplc/uplc检测目标成分(如多酚、药物活性成分)。 微生物存活率:平板计数法(益生菌)、荧光染色(活/死细胞区分)。 消化产物:sds-page分析蛋白质水解程度;dns法测还原糖释放量。 [ last edited by 小冀- on 2025-5-8 at 09:08 ] [ Last edited by 小冀- on 2025-5-8 at 09:08 ] |
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