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🌟巨噬细胞纯化：科研小白也能轻松上手
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做细胞实验的时候，有没有被巨噬细胞纯化的问题困扰过？今天就来给大家唠唠巨噬细胞纯化的两种超实用方法，让你轻松搞定！ 一、巨噬细胞纯化是个啥？ 巨噬细胞也叫组织细胞，是由血液中的单核细胞分化而来的。它们在免疫系统里超重要，能吞噬病原体和细胞碎片，是身体的“清洁工”。纯化巨噬细胞，就是要把它们从其他细胞里分离出来，方便后续研究。就像从一盘沙子里挑出金子，巨噬细胞就是那闪闪发光的金子！ 二、巨噬细胞纯化的两种方法：贴壁法和梯度离心法 贴壁法纯化巨噬细胞 配制细胞悬液：用含20%-40%小牛血清的RPMI-1640培养液，把巨噬细胞配成2×10⁶～4×10⁶/ml的浓度。然后把细胞悬液接种到培养皿中，37℃、5% CO₂培养箱里培养1小时或24小时。1小时培养节省时间，但会丢失一些粘附力弱的细胞；24小时可以得到更多细胞。20%-40%的小牛血清能减少B淋巴细胞的粘附。 去除未粘附细胞：摇晃培养皿，悬浮未粘附的细胞，吸出细胞悬液。用预温的Hanks液洗涤细胞3-4次。悬浮细胞可以重复粘附，得到更多巨噬细胞。 消化和洗涤细胞：用含2.5mmol/L EDTA的无钙镁Hanks液消化细胞，37℃处理15-30分钟。用吸管吹打分离细胞，离心（250×g，10分钟），去上清液。然后用预冷的Hanks液洗涤细胞3-4次，每次离心250×g，10分钟，去上清液。最后用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液悬浮细胞，台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力，将细胞配成所需的浓度。 梯度离心法纯化巨噬细胞 制备密度梯度：取15ml离心管，将制备好的各浓度密度梯度材料按下浓上淡的顺序依次分层加在离心管中，每个浓度2ml。最后加上巨噬细胞悬液3-5ml（约含2×10⁷～5×10⁷细胞）。 离心和洗涤细胞：4℃中，水平离心1000×g，30分钟。垂直取出离心管，小心吸出各交界面的细胞。分别用预冷的含1%小牛血清RPMI-1640培养液洗涤各交界面细胞2次，每次200×g，10分钟。最后用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液将细胞配成所需的浓度。 三、总结：巨噬细胞纯化，科研小白也能轻松搞定！ 巨噬细胞纯化虽然听起来有点复杂，但只要按照步骤来，就能轻松搞定！贴壁法适合快速得到一部分巨噬细胞，梯度离心法能得到更纯的细胞。两种方法各有优势，可以根据实验需求选择哦！ 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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