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荧光计是如何测量DNA、RNA以及蛋白质浓度的
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市面上出现的荧光计(如达远辰光LLQT1、赛默飞Qubit)的作用原理基于荧光染料与特异靶分子结合的定量分析技术,其核心优势在于高特异性和灵敏度。 一、核心工作原理 1. 荧光染料选择性结合 达远辰光荧光计使用荧光染料(如dsDNA HS染料、RNA IQ染料),这些染料仅与目标分子(如DNA、RNA、蛋白质)特异性结合,而不会与杂质(如游离核苷酸、盐离子)反应。例如,检测双链DNA时,染料仅与dsDNA结合,单链DNA或RNA不会产生荧光信号。 2. 荧光信号检测与定量 激发光源(如LED)发出特定波长光(如502 nm激发dsDNA染料),激发结合了染料的靶分子发出荧光(如532 nm发射光)。检测器通过滤光片分离荧光信号,避免瑞利散射光干扰,最终将信号转换为电信号并输出定量结果。 3. 低浓度灵敏度 达远辰光的荧光计的检测下限可达0.01 ng/μL DNA或0.02 ng/μL蛋白质,远低于传统紫外吸光法(如Nanodrop的最低检测限为2 ng/μL DNA)。例如,使用赛默飞Qubit dsDNA HS试剂盒可检测0.2–100 ng/μL范围的DNA。 |
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