| 查看: 1165 | 回复: 1 | |||
[交流]
分子生物学：PCR检测技术操作步骤 已有1人参与
|
|
聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR)是利用一段DNA为模板，在DNA聚合酶和核苷酸底物共同参与下，将该段DNA扩增至足够数量，以便进行结构和功能分析。PCR检测方法在临床上快速诊断细菌性传染病等方面具有极为重要的意义。 PCR为最常用的分子生物学技术之一。至今在世界范围内都有广泛的应用，作为生物学实验的一个重要的方法，其有着不可估量的作用。 简单来说分为以下三个步骤： 1.DNA变性，加热使靶DNA序列双链解离成单链DNA。 2.引物与靶DNA退火，适当降低温度，使两个引物分别结合成靶DNA两条的3′末端向5′末端延伸。 3.引物延伸，在DNA聚合酶的催化下，引物沿着靶DNA3′末端向5′末端延伸。新合成的DNA链在变性解离后，又可作为模板与引物杂交，并且在DNA聚合酶的催化下，引导合成新的靶DNA链。如此反复进行以上3个步骤，即可使靶DNA片段指数性扩增。 具体操作步骤如下： 1.在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。? ? ? ? 10×PCR buffer? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 5 μl? ? ?dNTP mix （2mM）? ? ? ? ? ? ? ? 4 μl? ? ?引物1（10pM）? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2 μl? ? ?引物2（10pM）? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 2 μl? ? ?Taq酶 （2U/μl）? ? ? ? ? ? ? ? ? 1 μl? ? ?DNA模板（50ng-1μg/μl）? ?? 1 μl? ? ?加ddH2O至 50 μl? ?? 视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，最后在72℃ 保温7min。? 3.结束反应。PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。? 虽然，PCR技术已经相当成熟，但对于一个传统实验室，不但要满足高科技的实验设备，合理的空间布局等基本条件，一般还具有人员素质专业性高、管理严谨度高、投入成本高、结果责任性高等特点。 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
filecode
已经有11人回复
-
应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键
已经有33人回复
-
FileCode能看出啥？
已经有19人回复
-
2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B?
已经有5人回复
-
职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊
已经有4人回复
-
奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样
已经有10人回复
-
综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？
已经有13人回复
-
是这周出结果还是下周出结果？
已经有3人回复
-
小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊
已经有9人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
lingyutianji
新虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 49.6
- 散金: 10
- 帖子: 20
- 在线: 1.4小时
- 虫号: 36274571
- 注册: 2025-03-18
- 性别: MM
- 专业: 细胞生物学研究中的新方法
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
|
Atik Cameras是一家卓越的科研级相机和天文观测相机制造商，产品适用于需要低噪声，高灵敏度和高动态范围的高端应用场景。 Atik Cameras TE系列科研制冷相机的成像技术采用新颖的新型腔室密封方法，同时增加制冷温度，噪声读数非常低 ，可以检测到最微弱的信号。 而TE-77作为TE系列最优秀的产品，常用于 化学发光，荧光成像，光谱学，显微镜和生物发光，细胞成像，活体成像等科研中。 除了选择前置或背面照明传感器，TE-77还可以增加一个45mm双稳定高速科学快门，开启时间为20.0毫秒。也可以调整案例或全面的软件开发工具包，以适应您的具体需求，所以请联系您，讨论您的需求。 在需要长时间曝光和高灵敏度的科学成像领域（例如化学发光检测、生物荧光成像、活体成像等生命科学领域及天文学观测），相机的性能直接决定了实验结果的可靠性与精度。Atik Cameras ChemiMOS凭借其零安培辉光（Zero Amp Glow）、超低噪声设计以及像素满阱容量，成为科学级成像系统的核心组件。 Atik ChemiMOS 在需要捕捉极为微弱信号的弱光成像条件下，满足科学系统集成成像方面的要求。以耶拿分析公司的 UVP ChemSolo Auto 成像仪为例，该成像仪在面对需要长时间曝光图像的任务时，Atik ChemiMOS 的高灵敏度、长时间曝光（支持数小时连续曝光）、独特的零安培辉光和低噪声设计以及高量子效率，ChemiMOS能够很好的应用在UVP ChemSolo Auto 成像仪，为科研人员提供了可靠的数据支持。 目前北京领宇天际科技有限责任公司有Atik TE-77和Atik CHemiMOS试用机，欢迎各位老师咨询试用。 |
2楼2025-04-07 15:46:44
