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斡侯1

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化 已有1人参与

上传了蛋白的三维结构(N端有很长的一段红色无规卷曲,是orf意外融合表达了吗)以及蛋白电泳图(电泳图右侧条带是8-200kd的marker,左侧是此蛋白胶图,中间偏下较粗的是蛋白正确条带,出现了上面差不多粗细的),为什么蛋白诱导表达后,过镍柱分离纯化,并取一定的样98° 10min煮后跑蛋白胶有两个条带,一条是正确的(48 kda),另一条比正确的条带分子量更大(约62kda),而且两者粗细差不多,分析那条分子量更大的条带形成的原因。蛋白C端带了HIS标签(短的那一边),表达载体是pet30-a+,且蛋白末端有终止密码子,且在HIS标签之后有终止密码子tga。

蛋白纯化


蛋白纯化-1

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斡侯1

新虫 (初入文坛)

2楼2025-03-25 21:57:03
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科研检测交流

金虫 (正式写手)


【答案】应助回帖

更大条带大概率是N端那段无规卷曲没切除、或翻译从上游ATU提前启动,导致N端额外多肽融合,分子量增大;C端HIS标签完整,所以仍能挂镍柱。
做N端测序或在上游加SD序列/换起始ATG就能验证并避免。
这种问题建议找专业的老师沟通下
蛋白纯化-2

3楼2025-08-18 15:47:38
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