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铜虫 (小有名气)

[交流] 🌟流式细胞术检测细胞凋亡:超全操作指南✨

做细胞凋亡实验的时候,是不是经常被各种细节搞得头大?今天就来给大家分享流式细胞术检测细胞凋亡的超全操作指南,让你的实验“一次成型”!

一、细胞凋亡是个啥?

细胞凋亡就像是细胞的“自杀程序”,细胞会变得圆滚滚的,和周围细胞“拜拜”,然后细胞膜向内皱缩,胞浆浓缩,最后被

吞噬细胞“吃掉”。这个过程很“安静”,不会引起炎症反应。所以,检测细胞凋亡对于研究细胞死亡机制超重要哦!

二、流式细胞术检测细胞凋亡:关键步骤

诱导培养时间要准确

诱导细胞凋亡的时间一定要卡准,不然细胞要么还没开始凋亡,要么已经“死透”了,实验结果就不准啦!

试剂操作要小心

Annexin V-FITC和PI是光敏物质,操作时一定要避光,不然荧光会“跑光”,影响结果。而且PI对皮肤有刺激,操作时要戴好手套,保护好自己哦!

细胞洗涤要干净

洗涤细胞时,要把上清弃干净,避免残留的PBS影响实验结果。就像洗衣服一样,一定要把“脏东西”洗干净!

染色时间要控制好

PI染色时间过长可能会让检测的凋亡率偏高,所以建议先进行Annexin V-FITC染色,上机前5分钟再加入PI染色。这样就能避免“假阳性”啦!

操作要轻柔

整个操作过程动作要轻柔,不要用力吹打细胞,尽量在4℃下操作。细胞很“脆弱”,轻一点才能让它们“乖乖的”!

检测要及时

荧光显微镜下观察细胞时,荧光很容易“碎灭”,所以观察要快,反应完毕后尽快检测。细胞凋亡是一个动态过程,拖久了荧光强度就会下降哦!

三、实验小贴士:避免“坑”的秘籍

优化实验条件

成功的凋亡检测受多种因素影响,比如细胞类型、细胞膜上PS的密度、诱导凋亡的方法等。把这些因素优化好,实验才能成功哦!

注意保护自己

实验过程中要注意保护好自己,戴好手套,避免试剂对皮肤和眼睛的刺激。安全第一,实验才能顺利进行!

记录详细

实验过程中要详细记录每一步操作,包括试剂用量、操作时间等。这样即使出现问题,也能快速找到原因并解决哦!

四、总结:流式细胞术检测细胞凋亡,细节决定成败!

流式细胞术检测细胞凋亡虽然有点复杂,但只要用心,就能成功。诱导时间要准确,试剂操作要小心,细胞洗涤要干净,染色时间要控制好,操作要轻柔,检测要及时。这些细节做好了,实验结果自然就准确啦!

毕合生物提供服务内容:分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物
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