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细胞培养小技巧：如何让细胞“变漂亮”？
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做细胞实验的时候，是不是经常遇到细胞形态不规则、状态差，甚至传代后细胞越来越“丑”的问题？别担心，今天就来给大家分享几个让细胞“变漂亮”的小技巧！ 一、细胞也有“脾气”，环境很重要！ 细胞就像小朋友，不同的细胞有不同的“脾气”，它们喜欢的环境也各不相同。有些细胞喜欢“热闹”，比如内皮细胞，数量多一点时生长得更好；而有些细胞喜欢“清静”，比如巨噬细胞和某些肿瘤细胞，数量少一点状态反而更好。巨噬细胞生长速度超快，贴壁也快，传代时要留很少量细胞，不然细胞形态就会变差。所以，宝子们在养细胞的时候，一定要摸清楚它们的“脾气”，找到合适的生长空间密度哦！ 二、细胞状态不好？来个“美容SPA”！ 如果细胞形态不好，或者看起来有点“脏”，别急，可以给它们做个“美容SPA”！对于贴壁细胞，可以试试下面的方法： 第一步：清洗 倒掉旧培养基，加入3ml PBS轻轻洗涤一次，再用滴管吸走。然后再加入3ml PBS预吹打一次，轻轻沿着瓶底吹一遍，吸走。这一步就像是给细胞“洗脸”，把表面的杂质清理干净。 第二步：正式消化 开始正式的消化和吹打。把吹打下来的细胞悬液加入新的培养瓶，事先加入培养基，放入培养箱培养。记得按时观察细胞贴壁情况，10分钟、20分钟、30分钟各观察一次。等到部分细胞贴壁后，迅速倒出培养基，加入3ml新培养基轻轻洗一次。这一步就像是给细胞“敷面膜”，让它们更好地适应新环境。 第三步：后续培养 加入完全培养基继续培养。如果一次效果不理想，可以重复多次，直到细胞形态完美。记得结合细胞的“脾气”，对于有密度依赖性的细胞，等贴壁细胞多一点再传代；反之则少一点。 对于悬浮细胞，如果有很多死细胞或细胞碎片，可以用离心法分离。吹散细胞后用离心管收集，离心后活细胞在上层，死细胞和碎片在下层。去掉上清，加入新鲜培养基轻轻吹打上层细胞，然后接种到新的培养瓶继续培养。这样就能把“坏细胞”清理掉，让“好细胞”继续生长啦！ 三、传代消化：细胞的“生死考验”！ 传代消化是细胞培养中的关键步骤，也是细胞状态变差的常见原因。每次消化都像是对细胞的一次“生死考验”，如果操作不当，细胞就会受到损伤，越长越差。为了避免这种情况，可以试试“四步消化法”： 第一步：清洗 倒掉旧培养基，加入少量新培养基洗1-2遍，把漂浮的死细胞洗掉。这是“前奏”，目的是清理杂质。 第二步：吹打 加入少量新培养基直接吹打一遍，把贴壁不牢固的细胞吹下来，再用培养基清洗一遍。两次所得悬液混合传入新瓶。这一步可以观察细胞对胰酶的敏感度。 第三步：胰酶消化 吸干净瓶内剩余液体，加入2ml PBS润洗一遍，吸掉弃之。再加入1ml左右的胰酶消化。显微镜下观察，待细胞间隙明显时，立即吸掉胰酶，加入新培养基吹打2-3遍，悬液传入新瓶。这一步可以最大程度地把细胞吹打成单个状态。 第四步：继续消化 把第三步吸出来的胰酶重新加入瓶内，继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。显微镜下观察，待细胞独立开来时，吸掉胰酶，加入新培养基吹打，悬液传入新瓶培养。这一步可以确保所有细胞都被均匀处理。 四、总结：耐心和技巧，让细胞“变漂亮”！ 细胞培养虽然有点复杂，但只要用心，就能让细胞“变漂亮”。不同的细胞有不同的“脾气”，要找到合适的生长环境；细胞状态不好时，可以给它们做个“美容SPA”；传代消化时，要小心操作，避免损伤细胞。只要掌握了这些技巧，细胞就会乖乖地生长，实验也会更顺利！ 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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