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原代细胞和传代细胞培养超全攻略
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被原代细胞培养和传代细胞培养搞得头大？今天就来给大家一次性搞清楚，让你的细胞实验不再迷茫！ ? ? 一、原代细胞培养：从零开始的“细胞养成记” 原代细胞培养就像是从种子开始种一棵树，要把动物组织从机体里取出来，经过各种处理，让细胞在培养基里生存、生长和繁殖。听起来是不是有点复杂？别怕，跟着步骤来就行！ 准备材料和仪器 仪器：培养箱（37℃）、培养瓶、吸管、离心机…… 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清）、0.25%胰酶、Hank's液等。 处理组织 把组织块放在烧杯里，用Hank's液洗2-3次，去掉血污。如果怀疑污染，就用青链霉素泡30-60分钟。 剪切和消化 用眼科剪把组织切成2-3毫米的小块，然后加入胰蛋白酶液，放到37℃的温箱里消化。每隔20分钟摇一摇，直到细胞分散成团或单个细胞。? 分离和计数 用筛子过滤掉没消化开的组织块，离心后吸出上清，加入培养液。用计数板数一数细胞密度，调整好后分装到培养瓶里。 培养 把培养瓶放到36.5℃的温箱里，静待细胞生长。如果用CO?温箱，记得用纱布或螺旋帽堵住瓶口。 二、传代细胞培养：让细胞“开枝散叶” 当细胞在培养瓶里长成致密单层后，就需要传代培养了。这一步就像是给细胞“搬家”，让它们有更多空间生长。 吸除旧培养液 把培养瓶里的旧培养液吸掉，给细胞“换水”。 胰酶消化 加入少量胰蛋白酶和EDTA混合液，放到温箱里2-5分钟，直到细胞开始松动。然后立即终止消化，吸掉消化液。 冲洗和吹打 用Hank's液冲洗掉残余消化液，然后用吸管轻轻吹打瓶壁，让细胞形成悬液。记得动作要轻，别把细胞吹跑了！ 分装和培养 用计数板数一数细胞密度，然后把细胞悬液分装到新的培养瓶里，继续放到温箱里培养。 三、无菌操作：细胞实验的“生命线” 细胞实验最怕污染，所以无菌操作一定要做到位！ 洗手消毒 进入超净台前，记得洗手，用75%酒精擦手和试剂瓶口。 火焰保护 点燃酒精灯，操作尽量在火焰附近进行。耐热物品要经常烧灼消毒，但别烧太久哦！ 动作轻快 操作要准确敏捷，但别太快，防止空气流动带来污染。动作轻柔，别把细胞冲走。 布局合理 工作台面上的用品要布局合理，别用手触碰消毒过的器皿。物品摆放整齐，操作才会更顺手！ 发自小木虫手机客户端 |
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