| 查看: 281 | 回复: 2 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
[交流]
关于绿色荧光蛋白载体的一些问题
|
||||
|
问题：绿色荧光蛋白载体EGFP单独转染293T细胞是会不会出现绿色荧光？ 如果我在EGFP载体上插入一段序列，就是根据转染后有无荧光来确定这段序列是否表达了嘛？ 我再构建针对插入序列的RNAi载体，然后共同转染293T细胞，能不能根据转染后荧光亮度确定干扰载体的效率啊？       |
回复此楼» 猜你喜欢
什么是人一生最重要的？
已经有6人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有11人回复
-
网上报道青年教师午睡中猝死、熬夜猝死的越来越多，主要哪些原因引起的？
已经有9人回复
-
【博士招生】太原理工大学2026化工博士
已经有5人回复
-
280求调剂
已经有3人回复
-
面上可以超过30页吧？
已经有11人回复
-
版面费该交吗
已经有15人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有18人回复
2楼2009-11-03 20:33:52
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - BioEPI: 1
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
| 楼主说的这个载体貌似IRES载体，就是真核多蛋白表达载体，像原核生物多顺反子转录那样，但要在你的序列和EGFP之间插入一段IRES序列，你说的第三种RNA干扰的情况，我想是可行的，你用你插入序列构建RNAi载体，转入细胞后合成双链的你的插入序列，然后被切成小的21-24个小双链RNA，在dicer等酶的引导下降解转录的你的插入序列，这一步你的序列被降解了，但下游的EGFP本身上游带IRES，表面上看其编码序列没受影响可以继续合成EGFP，其实不然，其实下游的跟你插入的序列一起转录的EGFP序列也会干扰掉，是因为你插入的序列被切成21-24个nt序列后，与转录的产物(该产物有你插入序列和EGFP的长mRNA序列)结合，在RdRP(RNA dependent RNA polymerase)作用下进行amplification，所谓的spreading，合成EGFP的干扰双链RNAi，从而降解掉EGFP编码序列，这其中涉及的RNA干扰，建议你去看一下RNA干扰的机制，必备的知识，现在不是microRNA很热吗 |
3楼2009-11-03 21:03:59