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nnsz001

新虫 (初入文坛)

[交流] 16S rDNA

我做16S rDNA,提取总DNA后,用通用引物PCR,做了多次,对照的滴滴水老有带,有哪位高手指点一下!
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shenye.judy

木虫 (正式写手)

★ ★
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350784478(金币+1,VIP+0): 11-3 15:20
水也有带,那估计是做PCR的东西污染了,最好全换掉,包括酶、buffer、镁离子,引物新稀释,新灭的水,枪也换一把。再看看怎么样。
2楼2009-11-03 13:25:26
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fykxy_206

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
很正常的现象。我也遇到过
3楼2009-11-03 13:36:18
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nnsz001

新虫 (初入文坛)

每次做的对照“水”均有带,倒是细菌有的没有带,有的有带,怎么回事?
4楼2009-11-03 13:36:52
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nnsz001

新虫 (初入文坛)

该怎么办?
5楼2009-11-03 13:37:54
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
在保证你的引物序列没有搞错的情况下,可能的原因:
首选看看合成公司有没有将引物搞错;
其次可能是你的某个试剂是污染了;
最后可能是所提DNA含有杂质。

[ Last edited by jukongka on 2009-11-3 at 15:45 ]
6楼2009-11-03 15:44:13
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by nnsz001 at 2009-11-3 13:36:
每次做的对照“水”均有带,倒是细菌有的没有带,有的有带,怎么回事?

细菌的没有带?要么就是PCR失败了,要么就是PCR的量不够,或者是单引物扩增,都可能导致该出现带的地方没有出东西,你的引物是通用引物吧,建议你做个退火温度梯度,然后在来评估实验结果。
可以用QQ找我……
7楼2009-11-03 15:49:17
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xht

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
对照有带,也可能是引物本身有污染
重新合对引物看看阿
8楼2009-11-04 20:44:11
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