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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 16S rDNA
汕头大学海洋科学接受调剂
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nnsz001

新虫 (初入文坛)

[交流] 16S rDNA

我做16S rDNA，提取总DNA后，用通用引物PCR，做了多次，对照的滴滴水老有带，有哪位高手指点一下！
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1楼 2009-11-03 12:38:40
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shenye.judy

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
350784478(金币+1,VIP+0): 11-3 15:20
水也有带，那估计是做PCR的东西污染了，最好全换掉，包括酶、buffer、镁离子，引物新稀释，新灭的水，枪也换一把。再看看怎么样。
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2楼2009-11-03 13:25:26
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很正常的现象。我也遇到过
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3楼2009-11-03 13:36:18
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nnsz001

新虫 (初入文坛)
每次做的对照“水”均有带，倒是细菌有的没有带，有的有带，怎么回事？
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4楼2009-11-03 13:36:52
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nnsz001

新虫 (初入文坛)
该怎么办？
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5楼2009-11-03 13:37:54
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
在保证你的引物序列没有搞错的情况下，可能的原因：
首选看看合成公司有没有将引物搞错；
其次可能是你的某个试剂是污染了；
最后可能是所提DNA含有杂质。

[ Last edited by jukongka on 2009-11-3 at 15:45 ]
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6楼2009-11-03 15:44:13
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by nnsz001 at 2009-11-3 13:36:
每次做的对照“水”均有带，倒是细菌有的没有带，有的有带，怎么回事？

细菌的没有带？要么就是PCR失败了，要么就是PCR的量不够，或者是单引物扩增，都可能导致该出现带的地方没有出东西，你的引物是通用引物吧，建议你做个退火温度梯度，然后在来评估实验结果。
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可以用QQ找我……
7楼2009-11-03 15:49:17
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xht

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
对照有带,也可能是引物本身有污染
重新合对引物看看阿
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8楼2009-11-04 20:44:11
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