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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒提取
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yoyoyehan

[交流] 质粒提取

买的宝生物的质粒提取试剂盒，小量法提取，做了两次，都没有提出来，怎么办呀，请大家给点建议，
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1楼 2009-11-03 11:15:12
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★
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确定细菌里面有质粒？？takara的试剂盒我用过的啊，效果还是不错的啊
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可以用QQ找我……
2楼2009-11-03 11:20:25
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yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-11-3 11:20:
确定细菌里面有质粒？？takara的试剂盒我用过的啊，效果还是不错的啊

我是把pet放在含有卡纳的培养基里过夜培养的，应该有质粒吧，
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3楼2009-11-03 11:36:34
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
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引用回帖:
Originally posted by yoyoyehan at 2009-11-3 11:36:

我是把pet放在含有卡纳的培养基里过夜培养的，应该有质粒吧，

这个不好说，你质粒上面有特异片段没？PCR检测一下嘛。
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可以用QQ找我……
4楼2009-11-03 11:44:31
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
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350784478(金币+1,VIP+0):感谢参与 11-3 15:12
TakaRa的试剂盒还是很好用的，一步一步按照说明书来。动作要温柔。另外碱裂解后离心取上清尽量不要取到沉淀（我一般这一步用14000rpm离心）。最后洗脱可以将洗脱液吸回反复洗脱几次。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-11-03 12:01:45
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
提不出也不是试剂盒的问题，还是在菌上找问题，pet是属于严谨控制的质粒，是菌培养是否正常，用于抽质粒的菌量是否够
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2009-11-03 13:43:09
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bioxixi

木虫 (著名写手)
有没有忘了加溶剂，新试剂盒可能会有这个问题的
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7楼2009-11-03 15:07:36
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timdunken

新虫 (初入文坛)
试剂盒很好提的啊
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8楼2009-11-04 10:17:30
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★
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PET是低拷贝质粒提的量会少一些，即使为了提高产量而增加菌量，菌液总体积不要超过5毫升，否则裂解会不充分
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9楼2009-11-04 10:25:53
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guangming111

银虫 (小有名气)
提不出也不是试剂盒的问题，还是在菌上找问题
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10楼2010-01-10 15:32:59
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