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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】同一样品不同质谱分析结果不同！
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过而知之者

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】同一样品不同质谱分析结果不同！

蛋白样品经HPLC收集单峰下组分，分别利用ＡＢ公司 4000 Q TRAP 液质联用和 MALDI-TOF-TOF质谱分析，结果所测分子量分别为294.0和1094.597，为什么会有如此大的差异呢？请高手帮忙解释一下，我该以哪个结果为主？

[ Last edited by 过而知之者 on 2009-11-2 at 17:09 ]
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1楼 2009-11-02 16:27:33
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xiaomao2009

木虫 (小有名气)
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opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来分析版 11-2 23:42
做蛋白多用MALDI-TOF，而且蛋白本来也属于大分子啊，所以1094.597更可靠，294可能是蛋白的碎片
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有梦去追，希望相随～～
2楼2009-11-02 20:05:53
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sunny1212

木虫 (正式写手)
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Maldi出现的一般是单电荷质谱数据，ESI会出现带多个电荷的情况，请具体分析！有分子量为1000的蛋白吗？这么小？多肽爱差不多啊
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液相色谱-核磁共振-质谱联用技术
3楼2009-11-02 21:02:50
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过而知之者

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiaomao2009 at 2009-11-2 20:05:
做蛋白多用MALDI-TOF，而且蛋白本来也属于大分子啊，所以1094.597更可靠，294可能是蛋白的碎片

===
谢谢，我的样品实际是蛋白酶解产物超滤1kD得到的小肽混合物。所以结果有点不能理解了。
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4楼2009-11-02 22:48:51
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yuzhan

木虫 (正式写手)

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opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来分析版 11-6 17:29
有盐吗？没盐的话直接做质谱就得了，干嘛还要过滤呢？

PS：买几个除盐的枪头，直接用来做MALDI，效果岂不是更好？
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5楼2009-11-03 08:43:41
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过而知之者

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuzhan at 2009-11-3 08:43:
有盐吗？没盐的话直接做质谱就得了，干嘛还要过滤呢？

PS：买几个除盐的枪头，直接用来做MALDI，效果岂不是更好？

有少量的盐分的，但我的目的寡肽就是1kD的，所以我必须要超滤。这样的小分子的蛋白除盐比较困难，我用过C18的小柱效果也很不理想。除盐的同时蛋白损失比较大。
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6楼2009-11-03 13:45:23
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yuzhan

木虫 (正式写手)

Keep moving forward
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opq691(金币+2,VIP+0):thanks 11-15 15:02
蛋白含盐这是个通病，似乎没什么好办法。你可以试试NanoESI，如果含盐量不高的话，还不至于堵。如果你是在质谱实验室的，可以读读这篇论文，参考着做做。要是你的实验室只做测试的话，恐怕从质谱上考虑没什么好办法。你只能考虑各种除盐的办法了。

Chang, D.-Y.; Lee, C.-C.; Shiea, J. Detecting Large Biomolecules from High-Salt Solutions by Fused-Droplet Electrospray Ionization Mass Spectrometry. Anal. Chem. 2002, 74, 2465-2469.
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7楼2009-11-03 15:42:16
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过而知之者

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuzhan at 2009-11-3 15:42:
蛋白含盐这是个通病，似乎没什么好办法。你可以试试NanoESI，如果含盐量不高的话，还不至于堵。如果你是在质谱实验室的，可以读读这篇论文，参考着做做。要是你的实验室只做测试的话，恐怕从质谱上考虑没什么好办 ...

不好意思，似乎有点跑题。除盐不是主要的，我的寡肽蛋白样品经HPLC收集单峰下组分，分别利用ＡＢ公司 4000 Q TRAP 液质联用和 MALDI-TOF-TOF质谱分析，结果所测分子量分别为294.0和1094.597，为什么会有如此大的差异呢？
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8楼2009-11-04 18:33:33
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evilzhou

金虫 (小有名气)
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opq691(金币+1,VIP+0):感谢参与交流，欢迎常来分析版 11-6 17:29
Q-trap  用的是ESI 源吧,
离子可能带多个电荷 m/Z 不同
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9楼2009-11-05 20:06:20
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yuzhan

木虫 (正式写手)

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引用回帖:
Originally posted by 过而知之者 at 2009-11-4 18:33:

不好意思，似乎有点跑题。除盐不是主要的，我的寡肽蛋白样品经HPLC收集单峰下组分，分别利用ＡＢ公司 4000 Q TRAP 液质联用和 MALDI-TOF-TOF质谱分析，结果所测分子量分别为294.0和1094.597，为什么会有如此大的 ...

MALDI一般由于基质峰的原因，低质量区一般都舍掉的。不清楚你的实验是不是你自己做的，你可以看看MALDI用的什么基质？以及谱图的最低质量是多少？
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10楼2009-11-05 21:11:25
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