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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 克隆棉铃虫P450还原酶基因

要做论文了,现在需要棉铃虫P450还原酶的基因,请问各位高手如何才能获得P450还原酶的基因呢??
    现在问题是:
1、棉铃虫P450还原酶不知道怎么提取?
2、提取后是不是还要进行氨基酸测序?然后反推DNA序列,在进行人工合成?
3、面对各种性状的表达,我们该如何确定其表达基因呢?

本人基础有些薄弱,还请高手不吝赐教。先谢谢了
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pidou

木虫 (正式写手)

希望高手们能回复的尽量详细一些,虽然小弟金币不多,但是还可以追加的,再次感谢
2楼2009-11-01 22:35:19
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laojiu9878

至尊木虫 (知名作家)

九牛


pidou(金币+1,VIP+0):谢谢参与 11-3 15:44
提取rna,设计p450还原酶引物,rt-pcr就可以得到基因。有了基因就可以得到氨基酸序列。
但愿人长久
3楼2009-11-02 08:34:01
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jjlbest

木虫 (著名写手)

我觉得楼主应该可以去看看基因克隆的一般步骤,就会有一些思路了。
4楼2009-11-02 09:09:36
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pidou

木虫 (正式写手)

现在的问题是没有查到关于棉铃虫P450还原酶的基因的报道,怎么去设计引物呢??

请高手现身啊!!!
5楼2009-11-03 15:45:04
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vivihao

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★
pidou(金币+2,VIP+0):谢谢提供信息 11-4 13:57
pidou(金币+1,VIP+0):追加1个 11-4 13:58
pidou(金币+3,VIP+0):谢谢提供信息 11-4 13:58
家蚕P450还原酶好像有人做过,序列也是已知,LZ可以找到序列,设计引物,PT-PCR,看能否括出来,因为,家蚕和棉铃虫都是鳞翅目,基因的同源性应该很高。小弟菜鸟,仅供参考。
6楼2009-11-04 12:43:48
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-5 08:17
pidou(金币+7,VIP+0):谢谢香菱儿的注意。。。希望能继续关注,给些建议 11-5 12:40
搜索其他昆虫的P450还原酶基因,做多序列连配,找出保守区,根据保守区设计引物或简并引物,从棉铃虫的cDNA中扩增棉铃虫P450还原酶基因的保守区;然后再通过3'RACE和5'RACE得到全长。
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
7楼2009-11-04 17:23:52
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

LS正解
8楼2009-11-05 05:38:14
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)

★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-5 08:17
pidou(金币+1,VIP+0):谢谢参与 11-5 12:50
拿到这个基因后,你可以构建这个基因的RNAi载体,转到植物中, 然后让棉铃虫吃, 看棉铃虫活得怎么样, 07年有一篇中国人发的NATURE好像就是做这个 具体我忘了 不是我领域的.
9楼2009-11-05 05:40:29
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