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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 克隆棉铃虫P450还原酶基因
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pidou

木虫 (正式写手)

[交流] 克隆棉铃虫P450还原酶基因

要做论文了，现在需要棉铃虫P450还原酶的基因，请问各位高手如何才能获得P450还原酶的基因呢？？
    现在问题是：
1、棉铃虫P450还原酶不知道怎么提取？
2、提取后是不是还要进行氨基酸测序？然后反推DNA序列，在进行人工合成？
3、面对各种性状的表达，我们该如何确定其表达基因呢？

本人基础有些薄弱，还请高手不吝赐教。先谢谢了
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1楼 2009-11-01 22:33:36
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pidou

木虫 (正式写手)
希望高手们能回复的尽量详细一些，虽然小弟金币不多，但是还可以追加的，再次感谢
赞一下 回复此楼
2楼2009-11-01 22:35:19
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛
★
pidou(金币+1,VIP+0):谢谢参与 11-3 15:44
提取rna,设计p450还原酶引物，rt-pcr就可以得到基因。有了基因就可以得到氨基酸序列。
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但愿人长久
3楼2009-11-02 08:34:01
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jjlbest

木虫 (著名写手)
我觉得楼主应该可以去看看基因克隆的一般步骤，就会有一些思路了。
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4楼2009-11-02 09:09:36
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pidou

木虫 (正式写手)
现在的问题是没有查到关于棉铃虫P450还原酶的基因的报道，怎么去设计引物呢？？

请高手现身啊！！！
赞一下 回复此楼
5楼2009-11-03 15:45:04
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vivihao

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
pidou(金币+2,VIP+0):谢谢提供信息 11-4 13:57
pidou(金币+1,VIP+0):追加1个 11-4 13:58
pidou(金币+3,VIP+0):谢谢提供信息 11-4 13:58
家蚕P450还原酶好像有人做过，序列也是已知，LZ可以找到序列，设计引物，PT-PCR，看能否括出来，因为，家蚕和棉铃虫都是鳞翅目，基因的同源性应该很高。小弟菜鸟，仅供参考。
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6楼2009-11-04 12:43:48
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-5 08:17
pidou(金币+7,VIP+0):谢谢香菱儿的注意。。。希望能继续关注，给些建议 11-5 12:40
搜索其他昆虫的P450还原酶基因，做多序列连配，找出保守区，根据保守区设计引物或简并引物，从棉铃虫的cDNA中扩增棉铃虫P450还原酶基因的保守区；然后再通过3'RACE和5'RACE得到全长。
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
7楼2009-11-04 17:23:52
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
LS正解
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8楼2009-11-05 05:38:14
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michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+1,VIP+0): 11-5 08:17
pidou(金币+1,VIP+0):谢谢参与 11-5 12:50
拿到这个基因后,你可以构建这个基因的RNAi载体,转到植物中, 然后让棉铃虫吃, 看棉铃虫活得怎么样, 07年有一篇中国人发的NATURE好像就是做这个 具体我忘了 不是我领域的.
赞一下(20人) 回复此楼
9楼2009-11-05 05:40:29
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