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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 乙醇沉淀纯化PCR产物遇到的疑问
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)

[交流] 乙醇沉淀纯化PCR产物遇到的疑问

PCR产物一般经过纯化才能做后续的酶切或者转化，在用乙醇沉淀这个方法中，用用到乙酸钠缓冲液，ph5.2的，不知道作用是什么？一定要用吗？
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为梦想努力。
1楼 2009-11-01 20:01:43
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
提取时要将其沉淀都要加盐，这回道理是一样的，dna在有一定离子强度条件下，在乙醇体系里才可以沉淀，具体原理要查资料。
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海纳百川止于至善
2楼2009-11-01 20:05:39
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)
同一上楼的观点~~~
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3楼2009-11-01 20:25:36
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
具体过程是，加十分之一体积的醋酸钠(pH 5.2), 加2-2.5倍体积的无水乙醇，然后-20 or -80度冷却一定时间，一般半个小时足够了，然后4度离心
加醋酸钠的目的，钠离子带正电荷可以与带负电荷的DNA结合，抵消DNA的部分负电荷，削弱DNA分子因为都带负电荷而产生的斥力，在沉淀过程中DNA分子的易于相互聚集，然后加入乙醇，由于乙醇跟水任意比例互溶，所以乙醇与DNA竞争结合水分子，进一步析出DNA，！！！加样过程中，先加醋酸钠，然后再加无水乙醇！！！
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-11-01 20:47:43
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-1 20:47:
具体过程是，加十分之一体积的醋酸钠(pH 5.2), 加2-2.5倍体积的无水乙醇，然后-20 or -80度冷却一定时间，一般半个小时足够了，然后4度离心
加醋酸钠的目的，钠离子带正电荷可以与带负电荷的DNA结合，抵消DNA的部 ...

也可以直接用冰乙醇（无水乙醇放置-20℃下2h左右）。
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-11-01 21:45:31
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kitty8682

金虫 (正式写手)
学习了
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6楼2009-11-01 21:51:04
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
谢谢大家啊，现在明白了
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为梦想努力。
7楼2009-11-02 12:00:19
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
也可以直接用冰乙醇（无水乙醇放置-20℃下2h左右）。 [/quote]
这个都不要紧的，我都不冷却直接沉淀，只要能起到冷却效果，怎么弄都行
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2009-11-02 16:29:34
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