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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)

[交流] 乙醇沉淀纯化PCR产物遇到的疑问

PCR产物一般经过纯化才能做后续的酶切或者转化,在用乙醇沉淀这个方法中,用用到乙酸钠缓冲液,ph5.2的,不知道作用是什么?一定要用吗?
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1949stone

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海纳百川


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
提取时要将其沉淀都要加盐,这回道理是一样的,dna在有一定离子强度条件下,在乙醇体系里才可以沉淀,具体原理要查资料。
海纳百川止于至善
2楼2009-11-01 20:05:39
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diaoyuhua

金虫 (小有名气)

同一上楼的观点~~~
3楼2009-11-01 20:25:36
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
具体过程是,加十分之一体积的醋酸钠(pH 5.2), 加2-2.5倍体积的无水乙醇,然后-20 or -80度冷却一定时间,一般半个小时足够了,然后4度离心
加醋酸钠的目的,钠离子带正电荷可以与带负电荷的DNA结合,抵消DNA的部分负电荷,削弱DNA分子因为都带负电荷而产生的斥力,在沉淀过程中DNA分子的易于相互聚集,然后加入乙醇,由于乙醇跟水任意比例互溶,所以乙醇与DNA竞争结合水分子,进一步析出DNA,!!!加样过程中,先加醋酸钠,然后再加无水乙醇!!!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-11-01 20:47:43
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-11-1 20:47:
具体过程是,加十分之一体积的醋酸钠(pH 5.2), 加2-2.5倍体积的无水乙醇,然后-20 or -80度冷却一定时间,一般半个小时足够了,然后4度离心
加醋酸钠的目的,钠离子带正电荷可以与带负电荷的DNA结合,抵消DNA的部 ...

也可以直接用冰乙醇(无水乙醇放置-20℃下2h左右)。
Thank-you,so-blue.
5楼2009-11-01 21:45:31
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kitty8682

金虫 (正式写手)

学习了
6楼2009-11-01 21:51:04
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)

谢谢大家啊,现在明白了
为梦想努力。
7楼2009-11-02 12:00:19
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gyesang

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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
也可以直接用冰乙醇(无水乙醇放置-20℃下2h左右)。 [/quote]
这个都不要紧的,我都不冷却直接沉淀,只要能起到冷却效果,怎么弄都行
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
8楼2009-11-02 16:29:34
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