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人白细胞介素 1β 检测指南
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人白细胞介素 1β 检测指南 实验前，抗人白细胞介素 1β 抗体早已在微孔酶标板这个 “秘密基地” 布下 “天罗地网”。当加入 IL-1β 校准品和待测样本时，IL-1β 就像 “小目标”，主动与抗体结合。紧接着，HRP 标记的抗人白细胞介素 1β 抗体也来 “凑趣”，三者形成稳固的 “夹心复合物”。经过一番温育和充分洗涤，去除未结合的杂质后，加入底物 A 和 B，在 HRP 这位 “魔法师” 的催化下，底物从无色变为蓝色，再加入终止液（2M 硫酸），瞬间变成黄色。神奇的是，黄色的深浅与 IL-1β 的浓度成正比。最后，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），就能计算出样本中 IL-1β 的浓度。 实验前的准备工作至关重要。要提前 2 小时将试剂盒和样本从冰箱中取出，让它们在室温下 “苏醒”。从冰箱拿出的浓缩洗涤液若有结晶，别担心，这是正常现象，放在温水里泡一泡，结晶就会融化，然后按 1:20 的比例用蒸馏水稀释。底物液 A 和 B 需在使用前按 1:1 的体积混合，并且要在 15 分钟内使用，否则就会 “罢工”。 实验还需要一些 “小伙伴” 的助力，包括酶标仪（450nm）、精密移液器及一次性吸头、蒸馏水、洗瓶或自动洗板机、37℃水浴锅或恒温箱、500ml 量筒。 样本采集后，细胞培养上清、血清、血浆都要在 4000rpm 的转速下离心 20 分钟，上清液存放在 - 20℃以下，避免反复冻融。组织匀浆需用预冷的 PBS 冲洗、剪碎后按 1:9 的比例与 PBS 混合研磨，还可超声破碎或反复冻融，5000×g 离心 5 - 10 分钟取上清。细胞提取液的获取，贴壁细胞经 PBS 清洗、胰蛋白酶消化后离心收集，悬浮细胞直接离心收集，细胞用 PBS 洗涤 3 次，重悬后反复冻融，1500×g 离心 10 分钟取上清。其他生物体液则在 1000×g 离心 20 分钟后取上清检测。 操作时，先配制好工作液，从铝箔袋中取出所需板条，剩余的密封放回冰箱。设置好标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，加入相应液体后，加入 HRP 标记的检测抗体，用封板膜盖住反应板，在 37℃避光孵育 60 分钟。接着进行洗板，若用自动洗板机，别忘了添加 30 秒浸泡步骤。将底物混合后加入各孔，再次避光孵育 15 分钟，最后加入终止液，在酶标仪 450nm 波长上读取 OD 值。 以标准品浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，用计算机软件拟合创建标准曲线方程，通过样本吸光度计算浓度值，若样本被稀释，需乘以稀释倍数。 |
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