| 查看: 2496 | 回复: 0 | |||
[交流]
人唾液皮质醇（SC）ELISA 试剂盒：科研检测的有力工具
|
|
人唾液皮质醇（SC）ELISA 试剂盒：科研检测的有力工具 在生命科学的科研领域，准确测定人唾液皮质醇（SC）的含量对于深入研究人体生理和病理机制具有重要意义。人唾液皮质醇（SC）定量检测试剂盒（ELISA）为科研人员提供了一种精准、可靠的检测手段。在使用该试剂盒之前，深入了解其原理、操作方法、注意事项等方面的内容，是确保实验顺利进行并获得准确结果的关键。 一、实验原理：竞争抑制反应的科学运用 本试剂盒采用酶联免疫分析方法，基于竞争抑制反应原理实现对人唾液皮质醇（SC）的检测。以纯化的抗 SC 抗体包被微孔板，如同搭建了一个专门的 “检测舞台”。实验时，生物素标记的 SC 与样本或校准品中的非标记抗原（SC），在一定量的固相抗体上展开 “竞争”。当非标记抗原量较多时，抗体与生物素标记的 SC 结合量就会减少；反之，结合量则增多。 反应平衡后，形成固相抗体 - 生物素化 SC，随后加入酶标记的亲和素，进一步形成固相抗体 - 生物素化 SC - 酶标 - 亲合素复合物。加入底物显色后，利用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值）。随着样本中 SC 浓度的升高，OD 值逐渐下降，呈现出良好的线性关系。凭借这一科学原理，该试剂盒具备了灵敏度高、特异性强、重复性好、操作简单、快速的特点，能够可靠地检测出血清中 SC 的变化情况。 二、试剂盒限制性：明确使用规范 为了确保实验的科学性与准确性，该试剂盒有着严格的使用限制。其一，仅供科研使用，严禁用于临床诊断，这是保障科研工作专业性的重要原则。其二，必须在试剂盒标示的有效期内使用，过期产品可能因性能下降而导致检测结果不准确。其三，不能与其他厂家的试剂盒或者组分混用，以免不同试剂之间的相互作用干扰实验结果。其四，若样品需要稀释，可使用 PBS（PH7.4）进行操作。其五，如果样本值高于最高标准品浓度值，需将样本适当稀释后再重新测定。其六，待测样本中可能存在的异嗜抗体会干扰检测结果，检测前务必排除该因素。其七，通过其他方法得到的检测结果与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性，这要求科研人员在数据处理和分析时要格外谨慎。 三、技术提示：注重细节确保实验成功 在使用试剂盒的过程中，一些技术细节至关重要。混合蛋白溶液时应避免起泡，因为泡沫可能会影响反应的均匀性和准确性。加校准品与样本时，每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头，公共组分采用悬臂加样的方式，以避免交叉污染。合适的温育时间和充分的洗涤步骤是保证实验结果准确性的必要条件，温育时间不足或洗涤不充分都可能导致误差。 使用自动洗板机时，加入一个 30 秒浸泡的步骤，可以显著提高检测精度。底物溶液正常应为无色液体，若在保存过程中变为蓝色，表明底物溶液已经失效，不可再使用。终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致，加入终止液后，蓝色底物产物会瞬间变为黄色。实验中用剩的板条，应立即放回自封袋中，在低温干燥的环境下密封保存。所有液体组分在使用前都要充分摇匀，严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作，只有严格遵循这些技术提示，才能确保实验的每一个环节都准确无误。 四、试剂盒组分与保存：妥善管理维持性能 未开封的试剂盒应保存在 2 - 8 度的环境中，以确保其性能的稳定性，过期试剂盒坚决不能使用。试剂盒包含多种重要组分，校准品为 0.5ml / 管 * 6 管，是由抗原配制的 6 个浓度标准品，浓度依次为 48、24、12、6、3、0 nmol/L，这些校准品如同 “刻度标尺”，为后续的结果计算提供了关键的参照依据。 96T/48T 规格的包被微孔板，已预包被固相抗体，为反应提供了稳定的场所。HRP 标记抗体、生物素化抗原、样本稀释液、底物液 A、底物液 B、终止液、20× 浓缩洗涤液等各有其独特的作用，共同协作完成检测过程。此外，还有说明书 1 份、自封袋 1 个、不干胶 2 片等辅助物品，说明书为实验操作提供详细的指导，自封袋用于保存剩余板条，不干胶则可用于标识等用途。 五、其他用品：完备准备助力实验开展 进行实验还需要一系列其他用品。酶标仪（450nm）是读取实验数据的核心设备，它能够精确测量吸光度（OD 值），为结果分析提供关键数据。精密移液器及一次性吸头用于准确量取各种试剂，确保加样的精度。蒸馏水用于稀释试剂，洗瓶或者自动洗板机用于清洗微孔板，保证实验的清洁度。37℃水浴锅或恒温箱为温育过程提供适宜的温度环境，500ml 量筒则用于量取相关液体，这些用品相互配合，共同为实验的顺利进行提供保障。 六、生物安全：严格规范保障实验安全 在实验过程中，生物安全是不容忽视的重要环节。检测必须严格符合实验室管理规范的规定，防止交叉污染的发生。所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置，以避免潜在的生物危害。 试剂盒的液体组分中含有 proclin - 300 防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，因此要避免吸入烟雾以及与皮肤接触。底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用，同样需要避免吸入烟雾。为了保障自身安全，实验时应戴上防护手套，实验完成后要彻底洗手，确保将安全风险降到最低。 七、样品的采集和储存：规范操作保证样品质量 不同类型的样品，其采集和储存方法各有不同。细胞培养上清需在 4000rpm 条件下离心 20min，去除细胞颗粒和聚合物后，将上清液保存在 20℃以下，并且要避免反复冻融，以防止样品性质发生改变。 血清采集时，要使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，在 4000rpm 条件下离心 20min，小心地分离出血清，然后将其保存在 - 20℃以下，同样要避免反复冻融。 血浆采集可使用肝素、EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，在 4000rpm 条件下离心 20 分钟取上清，血浆也需保存在 - 20℃以下并避免反复冻融。 对于组织样品，先用预冷的 PBS (0.01 M,pH = 7.4) 冲洗，去除残留血液，称重后剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1: 9 的重量体积比，可根据实验需要适当调整，并建议在 PBS 中加入蛋白酶抑制剂）一起加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为进一步裂解组织细胞，可对匀浆液进行超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清进行检测。 样本在 2 - 8℃条件下，可以储存 72h，或者在 - 20℃储存 6 个月。如果样本收集后不是一次检测完，应按一次用量分装冻存，避免反复冻融，使用时在室温下解冻，确保样品均匀充分解冻，这样才能保证样品的稳定性和检测结果的准确性。 八、检验方法操作程序：严谨流程确保结果准确 实验操作需严格按照既定的流程进行。首先，将各种试剂移至室温平衡两小时，使试剂达到最佳反应状态。然后取浓缩洗涤液，根据当批检测数量，用蒸馏水按 1：20 的比例稀释，混匀后备用。 接着，从密封袋中取出预包被板，设置一个空白对照孔，不加任何液体；每个校准品设 2 孔，每孔加入对应校准品 50μl；其余每个检测孔直接加入待测血清或质控品 50μl。 除空白孔外，所有孔加入生物素化抗原 50μl，混匀后贴上封板膜，放置在 37℃环境中温育 60 分钟。温育结束后，可选择手工洗板或洗板机洗板。手工洗板时，弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置 10 秒后甩干，重复 3 次后拍干；洗板机洗板则选择洗涤 3 次程序洗板后拍干。 之后，每孔加入酶标亲合素 50μl（空白对照孔除外），混匀并贴上封板膜，再次置 37℃温育 30 分钟。温育完成后，再次进行洗板操作，方法同前。 随后，每孔加显色剂 A 50μl，显色剂 B 50μl，振荡混匀后，在 37℃避光条件下显色 15 分钟，然后每孔加终止液 50μl。最后，使用酶标仪读取数据，取波长 450nm，先用空白对照孔调零点，然后测定各孔光密度值（OD 值）。 九、结果计算：科学分析得出准确浓度 检测完成后，以标准品浓度作为纵坐标，对应的吸光度（OD 值）作为横坐标，利用计算机软件，采用四参数 Logistic 曲线拟合（4 - pl）的方法，创建标准曲线方程。通过样本的吸光度（OD 值），代入方程即可计算出样品的浓度值。如果样品在检测前进行了稀释，那么通过上述方法测得的浓度值，要乘以稀释倍数，才是样品的最终浓度。 十、试剂盒性能指标：卓越品质值得信赖 该试剂盒具备卓越的性能指标。在物理性能方面，液体组分应澄清，无沉淀或絮状物，所有组分的包装应无破损，且各组分装量不少于组分表中要求。剂量反应曲线线性良好，用四参数 Logistic 曲线拟合（4 - pl），剂量 - 反应曲线相关系数（r）的绝对值应不低于 0.9900，表明浓度与吸光度之间具有高度的线性关系。 精密度方面，批内精密度和批间精密度都表现出色。对三组已知的高、中、低浓度样品，分别进行二十次在同一个板块内和不同板块内的精度评估，批内变异系数 CV% 小于 15%，批间变异系数 CV% 也小于 15%。灵敏度高，最低检出限不高于 0.1 nmol/L，能够检测出极低浓度的 SC。回收率方面，对三组已知的高、中、低浓度样品，进行五次在同一个板块内的回收率评估，回收率在 85% - 115% 之间，说明该试剂盒的检测结果具有较高的准确性和可靠性。 稳定性良好，在 2℃ - 8℃保存的情况下，有效期为 6 个月。检测范围为 3→48 nmol/L，能够满足不同科研实验对人唾液皮质醇（SC）含量检测的需求。 人唾液皮质醇（SC）定量检测试剂盒（ELISA）凭借其科学的原理、严格的操作规范、卓越的性能以及对生物安全的重视，为科研人员在人唾液皮质醇含量检测方面提供了有力的支持，是科研工作中不可或缺的重要工具。 |
回复此楼» 猜你喜欢
美国杜兰大学 (Tulane University) 招聘一名博士后研究员
已经有22人回复
-
文章合作，中科院一区 FC / BB 准备投稿，找大通讯
已经有2人回复
-
生物力学与组织工程学论文润色/翻译怎么收费?
已经有277人回复
-
实验试剂求助
已经有0人回复
-
有大佬会合成重铬酸铵吗？
已经有0人回复
-
生活不会亏待每一个认真努力的人
已经有0人回复
-
把心放稳，生活自会给你答案
已经有0人回复
-
你真正的底气，是悄悄努力的每一天
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
