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[求助]
巯基氨基酸分析
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求助各位大佬，分析巯基氨基酸（半胱氨酸，高半胱氨酸，谷胱甘肽）除了生化样品还可以测什么呀？我现在检出限太高了，线性只能到5uM，尝试多种富集方法都无效。我的分析体系只能在水碱性体系，尝试金纳米富集，但无法脱去（DTT试了，但不太行），正在尝试Cu离子富集。如果有大佬知道有什么高含量样品就更好了。万分感谢救救毕业焦虑的孩子吧 发自小木虫IOS客户端 |
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面对巯基氨基酸（如半胱氨酸、高半胱氨酸和谷胱甘肽）的检测问题，确实可能遇到检出限高的挑战。在尝试多种富集方法未果的情况下，可以考虑以下几个方面来改善你的分析体系： ### 1. 富集与分离技术 - **液相微萃取（LPME）**：这是一种绿色且高效的样品前处理技术，适合用于微量物质的富集。 - **固相微萃取（SPME）**：使用含有特定官能团的纤维进行选择性吸附，随后直接进样到色谱系统中分析。 - **磁性纳米粒子（MNPs）**：结合了纳米技术和磁性的优势，能够提供高效的选择性富集，并且易于通过外部磁场回收。 - **分子印迹聚合物（MIPs）**：特异性地识别目标分子，可用于复杂基质中的目标化合物的提取。 对于你提到的金纳米颗粒富集的问题，确保使用的还原剂和稳定剂不会干扰后续的分析步骤。如果你尝试DTT脱去效果不佳，可以探索其他温和的化学条件或物理方法（例如超声波处理）以促进解吸。 ### 2. 分析方法优化 - **衍生化**：通过化学衍生化提高检测灵敏度。例如，使用荧光标记试剂（如monobromobimane, MBBr）或紫外可见吸收增强试剂（如Ellman's试剂）。这种方法不仅可以增加检测灵敏度，还可以帮助克服水碱性体系带来的限制。 - **电化学传感器**：开发针对巯基氨基酸的电化学传感器，利用其特有的氧化还原特性实现更敏感的检测。 - **毛细管电泳（CE）**：结合激光诱导荧光（LIF）检测，可显著提升灵敏度并减少背景干扰。 - **离子色谱（IC）**：如果线性范围受限于水碱性条件，可以考虑使用专用的缓冲液和柱填料来优化IC性能。 ### 3. 高含量样品来源 寻找高含量的样品作为参考或者校准标准可以帮助降低检出限： - **酵母提取物**：富含多种氨基酸，包括巯基氨基酸。 - **肝脏组织**：动物肝脏是谷胱甘肽的一个丰富来源。 - **某些植物材料**：例如大蒜、洋葱等，它们含有较高水平的硫醇类化合物。 - **商业化标准品**：购买高质量的标准品溶液，按照适当浓度配制工作曲线。 ### 4. 校正与优化 - **内标法**：引入一个已知浓度的内部标准物，有助于补偿样本间的变化并提高定量准确性。 - **多点校准曲线**：构建多个浓度点的标准曲线，确保在整个测量范围内都有良好的线性关系。 ### 5. 实验设计与统计分析 - **实验设计（DOE）**：采用响应面法或其他统计学方法优化实验参数，找到最佳的操作条件。 - **数据处理软件**：使用专业数据分析工具对原始数据进行处理，挖掘潜在的信息。 综上所述，针对当前面临的挑战，你可以从富集技术、分析方法、样品来源等多个角度入手解决问题。希望这些建议对你有所帮助，祝你顺利完成研究！如果你有更多具体的问题或需要进一步的帮助，请随时提问bhlw999。 发自小木虫手机客户端 |
2楼2025-01-20 11:15:41