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Spotl1ght

新虫 (初入文坛)

[交流] PEG修饰蛋白实验求助 已有1人参与

用等质量浓度的mPEG-SC和丝素蛋白，4摄氏度下搅拌24h，有白色固体析出；在20摄氏度下搅拌，大约30分钟也出现了同样的现象。请问有高手可以指点一下吗？

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1楼 2024-11-21 20:53:00
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Spotl1ght

新虫 (初入文坛)
在pH=8的PBS中反应的。

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2楼2024-11-21 20:56:44
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zhzh0731

金虫 (小有名气)
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是不是盐析出，无机缓冲液换成有机缓冲液试试
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3楼2024-11-25 09:12:59
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Spotl1ght

新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by zhzh0731 at 2024-11-25 09:12:59
是不是盐析出，无机缓冲液换成有机缓冲液试试

感谢，我尝试一下。另外，产物的AFM结果和PEG、丝蛋白直接混合的AFM结果差不多，我怀疑是没反应成功，请问这个反应还有其他的注意事项吗？
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4楼2024-11-26 14:41:12
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zhzh0731

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4楼: Originally posted by Spotl1ght at 2024-11-26 14:41:12
感谢，我尝试一下。另外，产物的AFM结果和PEG、丝蛋白直接混合的AFM结果差不多，我怀疑是没反应成功，请问这个反应还有其他的注意事项吗？...

有没有反应你可以看看液相和凝胶电泳，这个相对比较直观，蛋白析出反应效果肯定不理想
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5楼2024-11-26 16:00:15
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Spotl1ght

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by zhzh0731 at 2024-11-26 16:00:15
有没有反应你可以看看液相和凝胶电泳，这个相对比较直观，蛋白析出反应效果肯定不理想...

谢谢！
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6楼2024-11-27 09:45:20
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Spotl1ght

新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by zhzh0731 at 2024-11-26 16:00:15
有没有反应你可以看看液相和凝胶电泳，这个相对比较直观，蛋白析出反应效果肯定不理想...

不好意思又来打扰了，丝素蛋白的等电点大概在2-3，pH=8的PBS是不是影响不大呢？因为我查了一下很多文献都是用pH=7-9的PBS做的。
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7楼2024-11-28 09:38:17
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zhzh0731

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by Spotl1ght at 2024-11-28 09:38:17
不好意思又来打扰了，丝素蛋白的等电点大概在2-3，pH=8的PBS是不是影响不大呢？因为我查了一下很多文献都是用pH=7-9的PBS做的。...

这个蛋白没有用过，要不你降低蛋白的浓度尝试
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8楼2024-11-28 17:24:39
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