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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 将连接好的T载体倒入感受态细胞后培养16个小时左右了为什么平板上基本没有菌落？
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爱吃旺旺碎冰冰

新虫 (小有名气)

[求助] 将连接好的T载体倒入感受态细胞后培养16个小时左右了为什么平板上基本没有菌落？ 已有1人参与

将已经连接好质粒加入感受态细胞混匀，冰水浴静止30min；42摄氏度水浴锅热激90s；再冰浴5min，加入1mlLB新鲜培养基，37摄氏度，200rpm，培养1h；先吸取100微升菌液涂布在氨苄抗性平板上，剩余900微升11000rpm离心1min，弃去800微升，将剩余100微升左右涂布在另一个氨苄抗性平板上；将这两个平板放入37摄氏度恒温培养箱中过夜培养了16小时后，平板上只有一个或两个白色点状物，这是不是太少了啊，还是说基本没长菌落？原因是什么呢？

@天使托 发自小木虫IOS客户端
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1楼 2024-11-09 13:56:43
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strongFv

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这就是基本上没有长菌落呀。可能有两个原因：
1.片段没有连接上。检查连接操作是否规范，体系配比和T载连接试剂是否合适。
2.未成功转化。平板抗生素是不是对的？感受态活性如何、是否冻融后立即使用？
从以上两点基本可以排除原因。另外楼主这个转化时间有点偏长了，一些公司（比如擎科）出的感受态，冰浴5 min+热激45 s+冰浴2 min+直接涂板就可以，不需要那么久的。
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爱吃旺旺碎冰冰
2楼2024-11-24 19:14:42
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wwwkkk83

铁杆木虫 (著名写手)
做个试剂盒自带的阳性对照看看。
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3楼2024-11-25 16:24:09
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爱吃旺旺碎冰冰

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by strongFv at 2024-11-24 19:14:42
这就是基本上没有长菌落呀。可能有两个原因：
1.片段没有连接上。检查连接操作是否规范，体系配比和T载连接试剂是否合适。
2.未成功转化。平板抗生素是不是对的？感受态活性如何、是否冻融后立即使用？
从以上两 ...

OK谢谢🙏
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4楼2024-12-04 23:16:55
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