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爱吃旺旺碎冰冰

新虫 (小有名气)

[求助] 将连接好的T载体倒入感受态细胞后培养16个小时左右了为什么平板上基本没有菌落? 已有1人参与

将已经连接好质粒加入感受态细胞混匀,冰水浴静止30min;42摄氏度水浴锅热激90s;再冰浴5min,加入1mlLB新鲜培养基,37摄氏度,200rpm,培养1h;先吸取100微升菌液涂布在氨苄抗性平板上,剩余900微升11000rpm离心1min,弃去800微升,将剩余100微升左右涂布在另一个氨苄抗性平板上;将这两个平板放入37摄氏度恒温培养箱中过夜培养了16小时后,平板上只有一个或两个白色点状物,这是不是太少了啊,还是说基本没长菌落?原因是什么呢?

@天使托 发自小木虫IOS客户端
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strongFv

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这就是基本上没有长菌落呀。可能有两个原因:
1.片段没有连接上。检查连接操作是否规范,体系配比和T载连接试剂是否合适。
2.未成功转化。平板抗生素是不是对的?感受态活性如何、是否冻融后立即使用?
从以上两点基本可以排除原因。另外楼主这个转化时间有点偏长了,一些公司(比如擎科)出的感受态,冰浴5 min+热激45 s+冰浴2 min+直接涂板就可以,不需要那么久的。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2024-11-24 19:14:42
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wwwkkk83

木虫 (著名写手)

做个试剂盒自带的阳性对照看看。
3楼2024-11-25 16:24:09
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爱吃旺旺碎冰冰

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by strongFv at 2024-11-24 19:14:42
这就是基本上没有长菌落呀。可能有两个原因:
1.片段没有连接上。检查连接操作是否规范,体系配比和T载连接试剂是否合适。
2.未成功转化。平板抗生素是不是对的?感受态活性如何、是否冻融后立即使用?
从以上两 ...

OK谢谢🙏
4楼2024-12-04 23:16:55
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