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承接实验外包

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案例分析
01
脑缺血动物模型

1、试验动物:SD大鼠

2、试验方法:阻断大鼠大脑中动脉引起脑局部缺血法
3、试验步骤:

(1)腹腔麻醉大鼠,沿颈部正中开口,钝性分离皮下组织,暴露出左侧颈总动脉,游离出颈总动脉1.5cm,穿线备用。

(2)向远心端找到颈外侧动脉,结扎,提起颈总备用线,在近心端,远心端用动脉夹夹住。

(3)在近心端动脉夹处,用注射器针头刺破血管,拿起位置距动脉夹1mm处,一手稍微提起动脉夹,一手用镊子夹住线栓。

(4)从小口插入动脉后,去掉远心端动脉夹,然后用镊子夹住线栓,线栓插入到颈内距分叉处1.8-2.0cm,用备用线将颈总和线栓一起结扎住,最好是结扎双道。

(5)记录线栓插入时间,在将动脉夹另一边近心端颈总结扎住,去掉动脉夹。

(6)逐层缝合,缝合完毕后用碘伏消毒。

(7)在MCAO造模缺血2h再灌注后的第0h和12h尾静脉注射待研究药物。

4、结果评定:

(1)神经症状,在MCAO后不同时间(小时及天数)观察动物的行为,按不同方案进行评分。较常用的评分为:0无异常;0.5竖毛,轻度运动低下;1.0前肢屈曲,运动障碍;2.0行动不协调,屈曲姿势,旋转运动;3.0偏瘫,不能站立和行走;4.0痉挛,昏睡;5.0死亡。

(2)用自动或被动防卫条件反射观察MCAO后不同天数的神经功能。

(3)MCAO 24h后再麻酔,取脑放在冰冷盐水中,30min后作冠状切片5片,TTC染色,求出脑梗死面积或体积。

(4)脑切片,石蜡包埋,染色,光学显微镜下观察神经细胞的病理改变,还可用盲法定量测定存活神经细胞数。

(5)可取缺血区脑组织测定自由基、神经营养因子等指标。

5、试验结果:

图片

1:假手术组       2:模型组       3:低剂量组      4:高剂量组

02
心肌缺血再灌注模型

1、试验动物:c57小鼠

2、试验方法:结扎冠状动脉再恢复灌注引起心肌局部缺血法
3、试验步骤:

(1)腹腔麻醉小鼠,胸骨左侧剃毛。

(2)胸骨左侧纵向剪开皮肤0.5厘米,钝性分离皮下肌肉,在分离三和四肋间暴露出胸膜。

(3)用镊子撕开胸膜进入胸腔,用止血钳撑开肋骨,暴露出心脏。

(4)用镊子轻轻撕破心膜,用止血钳轻轻把心脏夹出 (操作过程中不要碰到肺)。

(5)用6-0缝合线结扎,(结扎位置与左心耳尖平行处) 轻轻将心脏放回胸腔。在结扎时加入特制线栓,缺血相应时间后拔去线栓,制成心肌缺血再灌注模型。

(6)观察心脏里面有无出血,无出血后逐层缝合,缝合结束后擦拭碘伏消毒,然后拔出呼吸机,将小鼠放回笼内。

(7)缺血1小时后拔去线栓,制成心肌缺血再灌注模型。

4、结果评定:

(1)心电图:结扎后心电图显示ST段明显提高。

(2)TTC染色计算心肌梗死范围。

(3)组织形态学检查。

5、试验结果:

图片

正常心脏TTC染色       模型组心脏TTC染色,

                                梗死面积明显增大
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