| 查看: 1290 | 回复: 0 | |||
[交流]
IP ,COI-IP, PULL-down的区别和作用
|
|
一、免疫沉淀（IP） 图片 ①加入合适的抗体。 ②抗体与目标蛋白结合 ③蛋白质A或G,使抗体-蛋白质复合物不溶。 ④通过离心分离抗体-蛋白复合物，去除油脂等污染物并进行必要的清洗步骤。 免疫沉淀技术是一种经典方法，它基于抗体和抗原之间的特异性相互作用。这项技术被广泛应用于探究蛋白质相互作用、蛋白质与遗传物质之间的相互作用。通过免疫沉淀技术，可以有效确定两种蛋白质在完整细胞内的生理性相互作用，同时也是用于抗原检测和蛋白质纯化的重要方法之一。除此之外，CO-IP（共沉淀法）、CHIP（染色质免疫沉淀技术）、RIP（RNA免疫沉淀技术）等技术都是由免疫沉淀技术演变而来的。 原理:免疫沉淀（Immunoprecipitation，简称IP）原理是利用特定抗体与目标蛋白结合，并将其从混合物中沉淀出来，进而实现对蛋白的纯化与鉴定。 作用:富集和检测某一特定蛋白，为后续分析提供高纯度的样本。 应用:免疫沉淀主要用于研究蛋白质-蛋白质的相互作用，有助于揭示蛋白质复合物的组成。IP技术侧重于研究蛋白质复合物，适用于探究特定蛋白质的结合伙伴以及研究信号通路。 二、免疫共沉淀（CO-IP） 图片 免疫共沉淀技术是一种有效的方法，用于研究体内两种蛋白是否相互作用。该技术通过与已知蛋白结合的抗体来捕获整个已知蛋白复合物，从而研究与已知蛋白相互作用的其他蛋白。 原理:在免疫共沉淀技术的基础上，CO-IP通过特定抗体沉淀出与目标蛋白相互作用的其他蛋白质，揭示了这些蛋白质之间的相互关系。 作用:该技术的作用是检测两种蛋白是否在体内相互作用。 应用:免疫共沉淀技术可应用于构建蛋白质相互作用网络，从而发现目标蛋白的结合伙伴。此技术适用于鉴定特定蛋白质的相互作用伙伴，有助于了解蛋白质的功能和信号传导机制。 三、融合蛋白沉降试验（Pull-down） 图片 Pull-down是一种常用的体外蛋白相互作用检测方法，可用于验证已知蛋白之间的相互作用，并且适用于筛选那些可能与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 原理:其原理是将与特定标签（如GST标签、His标签和生物素标签）融合的蛋白固定在亲和树脂上作为诱饵蛋白。当目标蛋白或细胞裂解液经过时，能与诱饵蛋白结合的猎物蛋白会被捕获并沉降下来。经过洗脱后，通过蛋白印迹或质谱分析，可以验证预测的蛋白相互作用或发现未知的相互作用。 作用:这种方法的作用在于检测两种蛋白在体外是否发生直接结合。 应用  ull-down方法的应用主要体现在两个方面：一是验证两种已知蛋白之间潜在的相互作用；二是用于发现可以与已知蛋白发生相互作用的未知蛋白。四、CO-IP、Pull-down的优缺点 1.IP常用3种抗体的优缺点 图片 2.CO-IP的优缺点 优点:（1）在CO-IP分析中，诱饵蛋白和猎物蛋白展现出的是它们在体内天然的构象，这有助于更真实地模拟它们之间的相互作用。 （2）诱饵蛋白与猎物蛋白的相互作用发生在体内，受外界影响相对较小，这有利于排除干扰因素。 （3）实验中已有相应的抗体，整个分析过程可以快速高效地进行，无需进行蛋白的克隆和异源表达。 缺点:（1）当蛋白间的相互作用具有较低的亲和力或是短暂的情况时，这种相互作用可能无法被有效地检测到。 （2）由于无法完全排除其他蛋白参与的可能性，CO-IP的结果可能无法确定蛋白之间的相互作用是直接的还是间接的。 （3）CO-IP方法并非通用的方法，使用过程中需要具备特定的抗体支持。 3.Pull-down的优缺点 优点:（1）能够有效纯化低丰度蛋白质复合物，这对于分析和研究特定蛋白质相互作用具有重要意义。 （2）Pull-down技术还被广泛运用于体外转录或翻译系统的研究中，为研究者提供了有效的工具。 缺点:（1）蛋白质标签的引入可能会影响与内源性复合物的竞争结果，这可能导致对实验结果的误解。 （2）虽然Pull-down技术能够帮助检测蛋白质间的相互作用，但实际上这并不能真正反映蛋白质之间在生理上是否存在结合，因为它们并不一定会在体内发生相遇。 |
回复此楼» 猜你喜欢
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有7人回复
-
压汞仪和BET测气凝胶孔隙率
已经有4人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有14人回复
-
博士申请
已经有3人回复
-
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有13人回复
-
氨基封端PDMS和HDI反应快速固化
已经有11人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有11人回复
-
论文投稿求助
已经有4人回复
-
Applied Surface Science 这个期刊。有哪位虫友投过的能把word模板发给我参考一下嘛
已经有3人回复
-
投稿精细化工
已经有6人回复