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[交流]
western blot蛋白凝胶电泳
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| 在一个固定的点缓慢地加入胶，在胶凝固之前不要移动位置。加交叉梳子不要有气泡，然后加入蛋白样品，盖上盖子检查正负极，恒压100v大约跑90分钟，提前用1*Buffer浸泡NC膜，胶泡好后，小心的撬开玻璃板，把多余的胶切掉，三明治的顺序是黑色一面-海绵-滤纸-胶-NC膜-滤纸-海绵-白色一面，插入清洗过的电泳槽，倒入1*Buffer，倒入百分之五脱脂奶粉封闭一小时，（一抗孵育），将膜放入自封袋中，加入抗体，4度过夜，室温摇床用1*TBST洗膜三次，（二抗孵育）百分之三的脱脂奶粉，将显色剂均匀滴加于膜上，反应五秒，放入暗盒中，盖上暗盒曝光3-5秒，红灯下观察至条带出现。 |
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