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神经束路示踪技术
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神经束路示踪，是一种利用轴浆运输现象追踪神经元之间联系的方法。如果示踪剂能够通过轴浆运输跨过损伤区，说明有再生或从损伤区以外新生的轴突跨过损伤区。由于大部分神经纤维束路缺乏特异的免疫标记，所以，神经束路示踪技术可以称作研究轴突再生、判断神经元解剖结构是否完整和功能关系是否建立的标准。神经束路示踪技术可以分为四代，目前常用的为第二代逆行示踪和第三代顺行示踪，二者轴浆流的方向不同。第二代利用逆行追踪剂示踪，注射到神经纤维周围被神经末梢或轴突吸收后，逆轴浆流运输到神经元胞体。第三代是利用顺行追踪剂示踪，注射到神经元胞体周围，被神经元胞体吸收后，顺轴浆流主动运输到神经末梢。其中一些示踪剂还可以被荧光标记或本身可以发出荧光，便于用荧光显微镜直接观察。 常用的示踪剂有：HRP（horse radish peroxidase，辣根过氧化物酶），快蓝（fast blue），荧光金（fluorogold），核黄（nuclear yellow），神经生物素（neurobiotin），生物素化葡聚糖胺（biotinylated dextran amine,BDA）等，这里重点介绍CTB和BDA。 CTB是一种非常灵敏的示踪剂，既可用于逆行示踪，也可用于顺行示踪，还可以用于跨节示踪。B亚单位为霍乱毒素与细胞受体结合的亚单位，无毒性。标记结果的可视化可以用抗 CBT 的抗体染色，通过免疫组织化学方法显示出来；也可以用荧光素标记 CTB，在荧光显微镜下直接观察。CTB常常与HRP交联，形成CTB-HRP复合物，极大提高了作为示踪剂的灵敏度。 |
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