| 查看: 1043 | 回复: 1 | |||
[交流]
常见的肾间质纤维化动物造模方法 已有1人参与
|
|
肾间质纤维化 (renalinterstitialfibrosis，RIF)，既是慢性进展性肾脏病共同典型的病理形态学表现，又是决定肾功能衰竭进程的关键因素，是多种慢性肾脏病长期迁延，最终导致慢性肾功能衰竭的主要病理基础，由慢性肾小管间质损伤导致的肾间质纤维化已成为几乎所有肾脏疾病的共同最终结局。各种原因导致的慢性肾功能衰竭与肾小管间质纤维化的关系较与肾小球损伤的关系更为密切，RIF的研究成为近年来肾脏病学界的主流与热点，MDL已构建成熟的RIF动物模型。 动物的选择主要是大鼠。造模方法 造成肾小管间质纤维化的方法主要有手术 (单侧输尿管结扎、肾脏缺血-再灌注等-) 和药物 (环孢素 A、氨基糖苷类抗生素、肾毒性药物等) 两大类。其中, 目前应用最广泛的肾小管间质纤维化动物模型是单侧输尿管梗阻 (UUO) 动物模型。 单侧输尿管梗阻动物模型UUO模型是研究肾间质纤维化发生机制、肾脏细胞转分化和评价肾纤维化治疗方法的理想模型。 造模方法：大鼠以戊巴比妥钠（50mg/kg body weight）腹腔注射麻醉后，将大鼠右侧卧位固定于手术台上，剪毛后用碘酒75%酒精消毒手术区，行左侧腹切口，逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，暴露并分离左侧输尿管，用5-0丝线结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，在两道结扎点中点将输尿管切断，逐层缝合。 模型验证：大鼠术后切口无感染、出血、开裂；大鼠活动状态尚良好，饮食量减少，毛色稍有暗淡；左侧季肋区可触及肿大明显，部分可见左侧变大凸起；尿化验检测24 h尿蛋白增加，血生化检测血清肌酐、尿素氮升高；肾组织病理可见典型肾间质纤维化的表现，肾小球出现硬化，系膜细胞和基质弥漫性轻微增生，肾小管萎缩明显，呈多灶状或片状，部分出现肿胀、空泡变性或脱落、刷状缘消失等病理改变，肾间质纤维化、炎性细胞浸润，若肾脏无变化或萎缩，腹腔出现腹水，或实验过程中出现死亡都可判定该模型造模失败。 实验指标检测：大鼠于术后2周、4周开腹于下腔静脉采血，采血后使用4℃生理盐水灌注循环系统，待肾脏血色消失后分离肾脏留取标本，并记录肾脏重量，肉眼观察外观，将肾脏切为3块，置于10%多聚甲醛溶液中常温固定一夜。血液于4℃离心分离留取血清，并置于-80℃超低温冰箱中备检。 肾脏病理检测：将已固定的肾组织冲洗、脱水、透明处理2次，后浸蜡、包埋、冷却后切成2μm厚切片，染色前常规脱蜡，冲洗去离子，行HE染色和Masson染色。光镜下观察各组标本肾小球、肾小管和肾间质病理情况使用彩色病理分析系统拍照，计算纤维化面积的百分比。 生化检测：全自动生化分析仪检测血清肌酐、尿素氮、24h尿蛋白。 优点：模型成功率高，对动物损伤小、死亡率低。方法简便，病变均一，有较好的重复性，手术成功率>95%。 缺点：大鼠单侧输尿管梗阻属于急性机械性损伤，不能适应肾小管和间质损伤及其纤维化的所有情况，但是该方法能够在短期内造成纤维化，就研究肾间质纤维化的发病规律及机制探讨而言，是一种较为快速、可靠的动物模型。 造模方法： 给盐耗竭大鼠皮下注射环孢素 A（cyclosporineA，CsA）15 mg/kg/d，共28d。 应用：本模型主要是用来研究 CsA引起 RIF的作用机制, 寻找出预防 CsA肾毒性的新药物。主要缺点是造模费用昂贵, 具有肝脏毒性, 且因服用 CsA所致的 RIF在所有肾间质纤维化中所占比例有限, 纤维化进程异于一般梗阻性原因所致RIF, 限制了其应用价值。 总结 UUO模型制作相对简单，有较好的重复性，肾间质纤维化发生迅速，可观察到肾脏细胞转分化过程。因此，UUO模型是一种研究肾纤维化发生机制、肾脏细胞转分化和评价肾纤维化治疗方法的理想模型。 |
回复此楼» 猜你喜欢
085602高分子方向求调剂
已经有3人回复
-
欢迎211本科同学，过A区国家线，A区非偏远一本，交叉学科课题组
已经有22人回复
-
289求调剂
已经有3人回复
-
求调剂
已经有4人回复
-
材料调剂
已经有5人回复
-
化工282求调剂一志愿211
已经有6人回复
-
A区一本交叉课题组，低分调剂，招收机械电子信息通信等交叉方向
已经有25人回复
-
材料085601一志愿哈工大317
已经有4人回复
-
材料与化工，291，求调剂
已经有8人回复
-
材料调剂
已经有5人回复
2楼2024-11-03 21:27:03
