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苏州默迪夫

新虫 (初入文坛)

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[交流] 多肽的溶解性

多肽的溶解性受其极性影响极大。
酸性的蛋白在碱性溶液中溶解，而碱性蛋白则会在酸性溶液中溶解。含有大量不带电荷的极性氨基酸残基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽，首先溶解在少量的有机溶剂中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或异丙醇，再加入蒸馏水进行稀释。然而，对于那些含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽，DMSO并不是一个适合的溶剂，因为它可能会引发侧链的氧化。
多肽溶解之前，建议进行多肽溶解测试。将多肽在多种不同的溶剂中进行尝试，找到最合适的溶剂。使用超声处理可以帮助打破颗粒，提高溶解度。但注意，超声处理可能会引发溶液发热并导致多肽降解。
1.将每个酸性氨基酸赋值为－1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）、以及羧基末端-COOH。每个碱性氨基酸赋值为＋1，包括精氨酸（R）、赖氨酸（K）、组氨酸（H）以及氨基末端-NH2。然后计算整个多肽的电荷数。
2.如果整段肽所带电荷是阳性的，说明该肽是碱性的。可先尝试用蒸馏水来溶解；如果不溶于水，接着尝试用少量10%-25%醋酸溶解，如果仍然失败的话，添加一些TFA（10-50微升）来增溶，然后用水稀释至理想浓度。
3.如果整段肽所带电荷是阴性的，说明该肽是酸性的。酸性的多肽可以尝试用PBS（PH 7.4）来溶解，如果不溶的话，添加少量的碱性溶剂，如0.1 M的碳酸氢铵，然后加水稀释至理想浓度。含有游离半胱氨酸的多肽应溶于脱气的酸性缓冲液中，因为当PH值大于7时，巯基会被迅速氧化成二硫化物。
4.如果整段肽电荷是零，说明肽是中性的。中性肽通常溶于有机溶剂。首先，尝试添加少量乙腈、甲醇或异丙醇。对于高度疏水的多肽，可使用少量的二甲基亚砜溶解，然后用水稀释至理想浓度。对于含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。对于有聚集倾向的肽，可添加6M盐酸胍或8M尿素，然后进行必要的稀释。
为了防止或减少多肽降解，请将多肽以冻干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小样存放，以避免反复冻融。一份样品融冻后未用完，应扔掉。细菌降解有时会成为溶液肽的麻烦，所以请将肽溶于无菌水或肽溶液过滤除菌。
碱性氨基酸:K,R,H,N-terminus
酸性氨基酸