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农杆菌转化利福平常见问题分析
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大家熟知植物遗传转化种必不可少的步骤，农杆菌转化，今天就农杆菌转化常见问题解说一下，说的不好，大家谅解，仅供参考！? 农杆菌的利福平抗性来源于农杆菌的一个核基因突变，不在Ti质粒上，所以利福平与Ti质粒是否丢失没有关系，利福平并不是农杆菌培养过程中必须要添加的抗生素；相反，在农杆菌培养基中加入利福平特别是加入利福平浓度过高会导致农杆菌生长变慢，侵染活力降低，不建议在农杆菌的培养基中加入利福平，在没有超净台的实验室加入利福平可以抑制杂菌生长，在超净台中进行农杆菌实验可不添加利福平（1-4）。 ? ? ? 不同农杆菌来源不同，有不同的核基因和Ti质粒，表现出不同的生长势，特别是在含有抗生素的培养基中生长时，表现出对抗生素不同的敏感度。EHA105对利福平更加敏感，生长更容易被利福平抑制，对利福平浓度的高敏感性也是EHA105菌株的一个鉴定标准。图1显示含有pCambia2301质粒的EHA105、LBA4404在LK50，LK50+Rif20，LK50+Rif50三种培养基中的生长曲线——利福平对EHA105菌株影响较大，在液体培养基LK50中添加利福平不仅影响EHA105的生长速度，同时也影响EHA105的终浓度（在LK50中添加20ug/ml的利福平可以将EHA105的生长时间延迟7h，终浓度从OD600=6.42降到5.22，在LK50中添加50ug/ml的利福平可以将EHA105的生长时间延迟11h，终浓度从OD600=6.42降到4.13；而对照菌株LBA4404对液体培养基中利福平的浓度变化并不敏感，只是终浓度略有下降）。 此观点仅供参考 发自小木虫IOS客户端 |
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