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提取肿瘤组织消化后得到的肿瘤细胞死亡率过高
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Balb/c小鼠的4T1肿瘤。取出移植瘤，浸入1640溶液中，使用手术刀/眼科剪将肿瘤组织尽可能剪碎。加入配置了Ⅰ型胶原酶（1mg/ml）和DNase（0.01mg/ml）的HBSS溶液于37摄氏度恒温摇床消化60分钟。使用200目滤网过滤并用注射器研磨（每个肿瘤3分钟）得到单细胞悬液。裂红并计数（用时60min）进行后续的染色。 目前发现染了死后之后上流式，死细胞很多。目前我怀疑：1.研磨+计数共用了2h，这个时间太久导致细胞死亡；2.消化太久导致细胞死亡。有没有解决过类似情况的同学帮忙解答问题在哪儿 |
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