| 查看: 891 | 回复: 6 | |||
[交流]
干货分享 | 一文了解分子生物实验常用的几种酶的作用原理
|
|||
|
01 限制性内切核酸酶 限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中。 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶(“分子手术刀”)。 发现于原核生物体内，现已分离出100多种，几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。例如，从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别GAATTC序列，并在G和A之间将这段序列切开。 目前已经发现了200多种限制酶，它们的切点各不相同。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因，就能被某种限制酶切割下来。 02 DNA连接酶 DNA酶能利用ATP或NAD+水解提供的能量催化DNA链的5'-磷酸末端与另一DNA链的3'-OH生成3',5'-磷酸二酯键，从而把两个DNA链连接起来。 常见的DNA连接酶有T4 DNA连接酶，Taq DNA连接酶等，这些酶的主要连接DNA片段之间的磷酸二酯键，起连接作用。 03 DNA聚合酶 DNA聚合酶的主要功能是催化脱氧核苷酸之间的聚合反应。主要是连接DNA片段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键，在DNA复制中起作用。 DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。 DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链;而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。 04 RNA聚合酶 04 RNA聚合酶 图片 RNA聚合酶以完整的双链DNA为模板，转录时DNA的双链结构部分解开，转录后DNA仍然保持双链的结构。 真核生物RNA聚合酶：真核生物的转录机制要复杂得多，有三种细胞核内的RNA聚合酶：RNA聚合酶I转录rRNA，RNA聚合酶II转录mRNA，RNA聚合酶III转录tRNA和其它小分子RNA。在RNA复制和转录中起作用。 05 逆转录酶 逆转录酶是属RNA指导的DNA聚合酶，具有三种酶活性，即RNA指导的DNA聚合酶，RNA酶，DNA指导的DNA聚合酶。 在分子生物学技术中，作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。 06 解旋酶 解旋酶是一类解开氢键的酶，由水解ATP来供给能量它们常常依赖于单链的存在，并能识别复制叉的单链结构。在细菌中类似的解旋酶很多，都具有ATP酶的活性。大部分的移动方向是5'→3'，但也有3'→5'移动的情况，如n'蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中，就是按3'→5'移动。在DNA复制中起作用。 07 核酸酶 核酸酶就是指能降解核酸的酶，与聚合酶的功能相反，它们水解或打开在多核苷酸链中的相邻核苷酸的磷酸二酯键内的酯键。根据其特性不同，将核酸酶分为内切核酸酶和外切核酸酶，内切核酸酶能水解多核苷酸链中的内部键，而外切核酸酶则必须从末端开始水解反应。 根据其对核酸专一性，分为对DNA产生专一性作用的DNA酶（DNase);或对RNA特异性作用的RNA酶（RNase);甚至对DNA/RNA杂合体特异性作用的RNA酶H（RNase H),它切割杂合双连体的RNA链。 08 蛋白酶K 蛋白酶K是一种从白色念珠菌分离出来的强力蛋白溶解酶，具有很高的比活性，在较广的pH范围（4〜12.5)内及高温 (50〜70°C)下均有活性，EDTA等螯合剂或SDS等去垢剂均不能使之失活。用于质粒或基因组DNA、RNA的分离和抽提。 在病毒核酸检测中，蛋白酶K是病毒采样液中的重要组分之一，蛋白酶K可以裂解病毒的外壳蛋白并使其失活，同时将病毒基因组释放以便后续进行核酸抽提。 09 UNG酶 UNG酶（Uracil-N-Glycosylase）的作用原理是选择性水解断裂含有dUTP的双链或单链DNA中的尿嘧啶糖苷键，形成的有缺失碱基的DNA链，在碱性介质以及高温下会进一步水解断裂，从而被消除；UNG酶的最佳活性温度为50℃，在95℃会被灭活。 由于普通的Taq酶即使在室温下也有一定的活性，如果不采取措施，在加入PCR试剂的过程中、正式PCR开始前就会发生少量扩增，从而增加背景信号，可能影响PCR定量的精度。 因此在PCR试剂盒中可使用dUTP代替dTTP，如果在实验前产生非特异性扩增，产物会含有dUTP，在定量PCR开始前增加50℃的保温步骤，UNG酶即可将已有的PCR产物降解破坏，防止可能造成的污染。 |
回复此楼» 猜你喜欢
参比制剂，自己做的PK数据与IF资料报道的数据相差很大
已经有2人回复
-
祈求中本子
已经有0人回复
-
药物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有136人回复
-
脑梗怎么治疗
已经有3人回复
-
脑梗怎么治疗
已经有0人回复
-
各位大佬，H口面上什么时候会评？？？
已经有30人回复
-
生物组织中有目标分析物，专属性怎么做
已经有0人回复
-
2026年山东大学海洋学院生物与医药博士招生-李霞课题组
已经有0人回复
-
博士研究生招生
已经有0人回复
-
药理学、临床药学方向 调剂
已经有1人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
崂山国家实验室博士后岗位招聘
+2/256
-
中南大学材料院赵子谦课题组2026年招收硕博研究生、博士后研究员和科研助理
+3/162
-
有机化- 陆红健课题组诚招2026级、2027级博士研究生及博士后
+1/80
-
华南师范大学（211）博士招生- 电子、自动化、机械、生物学、物理相关专业
+2/66
-
福建师范大学化学与材料学院杜克钊团队招生
+1/40
-
青岛科技大学高分子学院李明杰老师招收高分子材料方向硕博士研究生，欢迎联系！
+1/34
-
课题组常年招收硕士/博士研究生、博士后
+2/26
-
2026年西南科技大学功能涂层课题组简介
+1/25
-
北京理工大学-化学与化工学院-招收2026级博士生 [申请-考核制]
+1/21
-
教育部长江学者和创新团队发展计划”入选团队招收 材料，化学与化工博士研究生
+1/20
-
福建师范大学化学与材料学院杜克钊团队博士/硕士招生
+1/18
-
（国家级人才团队 ）医药与生物技术方向 “申请-考核”制博士研究生招生
+1/8
-
哈尔滨理工大学材料与化学工程学院 纳米功能材料与光电催化团队 招收硕士研究生
+1/8
-
福建师范大学 院士团队 招2026级博士1名
+1/7
-
重庆大学药学院闫海龙课题组拟招收2026年申请考核制博士研究生数名
+1/7
-
中国石油大学（北京）国家级大人才团队博士招生3名：化学、材料、石油工程：油田化学
+1/4
-
总分291英一、数二-中核论文（导师一作、本人二作）-一志愿211学硕-自我介绍详细
+1/3
-
矿业工程招收硕士研究生
+1/1
-
香港理工大学招收2026年秋季及2027年春季博士
+1/1
-
南方科技大学生命科学学院基础免疫与微生物学系招收博士后
+1/1
简单回复
tzynew2楼
2024-07-24 09:06
回复
生物医药实验外�(金币+1): 谢谢参与
k 发自小木虫Android客户端
庚辰辛丑3楼
2024-07-24 11:56
回复
生物医药实验外�(金币+1): 谢谢参与
nono20094楼
2024-07-24 14:38
回复
生物医药实验外�(金币+1): 谢谢参与
·
2024-07-24 18:51
回复
生物医药实验外�(金币+1): 谢谢参与
生物医药实验外�6楼
2024-07-26 10:37
回复
1
tfang7楼
2024-07-26 16:53
回复
生物医药实验外�(金币+1): 谢谢参与
