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L6细胞提蛋白问题
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想问问大家有做过L6细胞的WB吗？这个细胞蛋白提出来浓度大概有多少？是很少吗？我用的10CM皿，但是测完浓度居然才有2-2.5左右，用的碧云天的裂解液强（自己加了2种抑制剂）还有配套的BCA试剂盒，但是感觉测出来的浓度会虚高一点。跑胶之后内参有，但是目标蛋白没有，我加了阳性药组，条带也很浅。换过CST的RIPA裂解液浓度也不高。想问问蛋白浓度低是什么原因？我加入裂解液后，冰箱放置20分钟然后用刮刀刮下来，超声大概30S吧（中间有间断），之后离心取上清。 我的上样量已经是45UL了。但是目标蛋白还是非常弱，有没有什么办法能让蛋白浓度高一点？两个10CM皿提一个样本吗？是这个细胞就这样吗？ 发自小木虫IOS客户端 |
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