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L6细胞提蛋白问题
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想问问大家有做过L6细胞的WB吗?这个细胞蛋白提出来浓度大概有多少?是很少吗?我用的10CM皿,但是测完浓度居然才有2-2.5左右,用的碧云天的裂解液强(自己加了2种抑制剂)还有配套的BCA试剂盒,但是感觉测出来的浓度会虚高一点。跑胶之后内参有,但是目标蛋白没有,我加了阳性药组,条带也很浅。换过CST的RIPA裂解液浓度也不高。想问问蛋白浓度低是什么原因?我加入裂解液后,冰箱放置20分钟然后用刮刀刮下来,超声大概30S吧(中间有间断),之后离心取上清。 我的上样量已经是45UL了。但是目标蛋白还是非常弱,有没有什么办法能让蛋白浓度高一点?两个10CM皿提一个样本吗?是这个细胞就这样吗? 发自小木虫IOS客户端 |
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