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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 补料发酵方面的问题
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waiter

木虫 (著名写手)

蛋白纯化系统（国产AKTA）销售


【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by wjny at 2024-08-11 21:02:48
感谢回答，我还想问两个问题。
1. 单位od表达量应该是相对菌体量来说的吧，单位应该是g/g（生物量），这相比于浓度g/L为什么更合适呢？
2.在工业上对于培养基碳源氮源等成分的优化中自然不需要太严格的要求，但是在 ...

单位OD表达量。和湿重表达量，单位体积表达量等等都一样，都是需要将样品重悬到一定体积，然后去检测重悬后样品中目标蛋白浓度， 都可以换算出整个发酵体积的目标表达总量。

但是，单位OD表达量，无论哪个发酵时期，样品量都是恒定都OD值。排除了菌体增长过程菌体量增加对 表达产率都影响。比如发酵终点OD是100.  发酵过程OD为1、5、10、50、100的时候都取样。 如果固定取100OD样品，这几个点取样体积就是100ml，20ml、10ml、2ml和1ml，统一离心并重悬到5ml，就制备成浓度20OD的样品。
如果以体积为单位，每个点取样2ml，这五个点样品OD就是2、10、20、100、200，统一离心并重悬到5ml，得到OD浓度就是0.4、2、4、20、40.这几个样品之间蛋白量差异并不是表达产率都差异，还包括菌量的差异早晨的产量差异。 不能真正反应菌都表达效率。



第二个问题您考虑的是。但是单因素还是多因素是可以转换的。但是单一原料无论成分是否复杂，是可以只当一个因素考虑的。因为你也无法改变这原料都成分。如果您能改变里面的成分配比，您就可以当多因素来做。
其实这些细节就是发酵的优化点，发酵优化过程主要是摸索菌体生长和蛋白表达的平衡关系。 菌长快了表达率低，菌体少了表达量少，既要菌体长，又要表达率不低，菌体量也要稳步增加。

前期生长过程比生长速率可以快点，进入表达阶段，可以通过调节pH、DO、温度和补料，降低比生长速率。让菌稳步生长，也稳步表达。



上游我原核还是做过一些实验。下游蛋白纯化做的更多一点。
你是学校还是企业，下游纯化也要做吗？
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11楼2024-08-13 22:10:31
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草木贲华

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by wjny at 2024-08-11 21:02:48
感谢回答，我还想问两个问题。
1. 单位od表达量应该是相对菌体量来说的吧，单位应该是g/g（生物量），这相比于浓度g/L为什么更合适呢？
2.在工业上对于培养基碳源氮源等成分的优化中自然不需要太严格的要求，但是在 ...

1. 用g/g是对应产物提取纯化阶段的，因为产物普遍在胞内，需要把菌体裂解且不破坏产物。因此对于破碎菌体，提取产物的工业流程来书，单位菌体的产物量才决定了工作量（比如我想要100 g产物，需要裂解多少菌体）。而一般在生产阶段，发酵的物料成本只有纯化步骤的几十分之一，因此对于整个生产来说，g/g高意味着纯化成本更低，意味着生产成本更低；g/L可以通过多发酵几次来解决。
2. 因为有机N源本身也是C源，尤其是最常用的酵母粉和蛋白胨，甚至不同牌子和批次之间也有差异；同时大肠杆菌发酵过程很难舍弃有机N源，这就决定了很难去讨论单因素。
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12楼2024-10-09 14:40:03
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hebsmile

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

发酵调控是多因素作用的结果，一个因素变化，可能会引起其他方面的多个变化，所以调控要全面去考察定义，更多的时候是看趋势，而不是单个变量。
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13楼2024-11-12 15:35:51
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