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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我的重组菌为啥不长？
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meizixijun

金虫 (小有名气)

那可以先转DH5a吗？

引用回帖:
Originally posted by humants at 2009-10-27 21:21:
其实你就按二楼的做一下试试，基本上就可以排除问题了，
转入空载的载体要是能成功，则说明你的链接没做好；
要是空载的也转不进去，说明你的感受态没做好或者时间太长死了。
再就是建议先转化到克隆宿主，而不 ...

我又做了一批，空载体转进去了，长得很好，但是重组菌就没长。也就是说连接有问题。这是否可以表示我的载体酶切是好的，可能基因没有酶切好？我可以延长酶切时间吗？你说先转克隆宿主，再转表达宿主，这个方法是不错。但我有个疑问：如果直接转表达宿主会受表达蛋白的毒害，难道转过克隆宿主后再转进表达宿主就不会被毒害了吗？

[ Last edited by meizixijun on 2009-10-30 at 11:52 ]
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追求梦想，快乐着我的快乐
11楼2009-10-30 11:51:26
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heismeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
第一个问题 你已经做了16个小时了 够长了 首先你要确认你的酶切是否成功 不行就换酶 如果你有Xba I 等酶 注意甲基化 切不动的话就根本连不上
还有确认你的vector来源 我上次没连成是因为我们技术员给我的载体本身就不对
不行你就测测你的vector序列
最后你现在要得到的是质粒 当然不能对细胞有毒了 细胞越多越好 你表达的时候细胞毒性也是个问题 但是你只要得到的是蛋白质
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12楼2009-10-30 14:28:25
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vivihao

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
先转DH5a，转化后培养抽重组的质粒，再转BL21。直接转BL21并不是不可，效果很差，我直接转BL21就没转成功，转DH5a后再转BL21后行了。
看了你写的东西，感觉不是感受态问题，因为空质粒转化成功了。
克隆时一是看操作，二是运气。祝LZ好运!
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13楼2009-10-30 14:43:52
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