24小时热门版块排行榜

返回列表

当前主题已经存档。

meizixijun

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 930.3
帖子: 67
在线: 57.1小时
虫号: 657524
注册: 2008-11-18
性别: MM
专业: 药物分析

那可以先转DH5a吗？

引用回帖:

Originally posted by humants at 2009-10-27 21:21:
其实你就按二楼的做一下试试，基本上就可以排除问题了，
转入空载的载体要是能成功，则说明你的链接没做好；
要是空载的也转不进去，说明你的感受态没做好或者时间太长死了。
再就是建议先转化到克隆宿主，而不 ...

我又做了一批，空载体转进去了，长得很好，但是重组菌就没长。也就是说连接有问题。这是否可以表示我的载体酶切是好的，可能基因没有酶切好？我可以延长酶切时间吗？你说先转克隆宿主，再转表达宿主，这个方法是不错。但我有个疑问：如果直接转表达宿主会受表达蛋白的毒害，难道转过克隆宿主后再转进表达宿主就不会被毒害了吗？

[ Last edited by meizixijun on 2009-10-30 at 11:52 ]

赞一下

回复此楼

追求梦想，快乐着我的快乐

11楼2009-10-30 11:51:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 898.1
散金: 38
帖子: 265
在线: 24.7小时
虫号: 316216
注册: 2007-03-03
性别: GG
专业: 免疫生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

第一个问题你已经做了16个小时了够长了首先你要确认你的酶切是否成功不行就换酶如果你有Xba I 等酶注意甲基化切不动的话就根本连不上
还有确认你的vector来源我上次没连成是因为我们技术员给我的载体本身就不对
不行你就测测你的vector序列
最后你现在要得到的是质粒当然不能对细胞有毒了细胞越多越好你表达的时候细胞毒性也是个问题但是你只要得到的是蛋白质

赞一下(1人)

回复此楼

12楼2009-10-30 14:28:25

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

vivihao

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 936
散金: 55
帖子: 91
在线: 71.8小时
虫号: 806882
注册: 2009-07-10
性别: GG
专业: 微生物学

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

先转DH5a，转化后培养抽重组的质粒，再转BL21。直接转BL21并不是不可，效果很差，我直接转BL21就没转成功，转DH5a后再转BL21后行了。
看了你写的东西，感觉不是感受态问题，因为空质粒转化成功了。
克隆时一是看操作，二是运气。祝LZ好运!

赞一下(1人)

回复此楼

13楼2009-10-30 14:43:52

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 meizixijun 的主题更新

返回列表