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科研虫子小助手

新虫 (小有名气)

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虫号: 34296917

[交流] 石蜡切片HE染色实验步骤-联系我

1.组织包埋

（1）乙醇脱水：组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水 70％ 80％ 90％ 95％ 100％ 100％，各级乙醇 40min（注意：骨性及钙化组织需在JYBL-Ⅱ脱钙液中浸泡24h，待组织软化后再进行乙醇脱水步骤）；

（2）透明：组织依次浸泡于三个二甲苯中，每缸各1h；

（3）浸蜡：组织依次浸泡于三个石蜡缸中，每缸各1h；

（4）包埋：将液态的石蜡倒入模具盒中，再将浸好蜡的组织块平放底部，注意切面方向朝下放置，待石蜡凝固后去掉包埋框，完全冷却变硬后再修整蜡块，组织外围的石蜡保留适中以便切片。

2.切片制作

将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上，使蜡块的切面与刀口成平行方向，刀的倾斜度通常15℃，转动轮转推进器，调节切片厚度为 4μm，切成厚度均匀的切片。左手持毛笔，右手旋动切片机转把，切片带出来之后，用毛笔轻轻托起，再用镊子轻镊蜡片，以正面放入展片箱中，其水温 45℃左右。待摊平整后捞片。贴附切片左手持载玻片之一端，垂直入水去附贴切片，右手用镊子辅助推动，附贴至玻片上的三分之二处。切片贴附后，放在空气中稍晾干，放置 65℃烤片机上烤1h，再放置烘箱内烘烤2h。

3.石蜡切片脱蜡至水

依次将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脱蜡。

4.HE染色

石蜡切片入苏木素染0.5-1分钟min，自来水漂洗，1%盐酸酒精分化数秒，自来水漂洗，然后1%氨水水溶液返蓝1min，流水冲洗数秒,放入伊红染液中染色数秒，流水漂洗。

5.脱水封片

石蜡切片依次放入75%乙醇 2min -85%乙醇 2min-无水乙醇5min -无水乙醇5min -二甲苯5min 透明，将切片从二甲苯拿出来中性树胶封片。

6.结果判读

细胞核为蓝色，细胞质为红色

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1楼 2024-07-09 16:42:36

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Longlight

铁虫 (初入文坛)

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★
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二甲苯脱蜡导致样本最终的得率低，而且对人有毒害，切片越厚或存放时间越长，脱蜡效果越差。作为溶剂法的替代，达远辰光BoFU聚焦超声纳米级别的处理使得FFPE样品彻底脱蜡和水化。

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