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浅谈几种逆转录病毒的检测方法
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按照中国药典三部中，生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制中表1的要求，逆转录病毒是细胞内、外源病毒因子检查中的重要一环，今天我们将就逆转录病毒的检查要求进行总体介绍，并于后续的推文中逐步介绍其检查方法。 已知鸡胚成纤维细胞（CEF）或其他禽源性细胞含有逆转录病毒序列，常可产生缺陷型逆转录病毒颗粒，逆转录酶活性为阳性，对这类细胞进行逆转录病毒检测时，可直接检测细胞基质中是否存在外源性逆转录病毒污染，如禽白血病病毒、禽网状内皮病肿瘤病毒、感染性内源性逆转录病毒。在某些情况下，也可通过监测鸡群，以保证无上述感染性逆转录病毒污染。 小鼠及其他啮齿类动物来源的细胞系含有逆转录病毒基因序列，可能会表达内源性逆转录病毒颗粒，因此，对于这类细胞系，应进行感染性试验，以确定所表达的逆转录病毒是否具有感染性。对于特定啮齿类细胞（如 CHO、BHK21、NS0 和 Sp2/0），还应确定其收获液中病毒颗粒的量及其是否有感染性逆转录病毒，并应在生产工艺中增加病毒去除和（或）灭活工艺。仅有高度纯化且可证明终产品中逆转录病毒被清除至低于现行检测方法的检测限以下时，方可使用这类细胞。 可采用下列方法对待检细胞进行逆转录病毒的检测： 一、逆转录酶活性测定 采用敏感的方法，如产物增强的逆转录酶活性测定法（ PERT 或 PBRT 法）（生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制 附录 1 或其他适宜的方法，但灵敏度不得低于现行方法）[1]，但由于细胞中某些成分也具有逆转录酶活性；因此，逆转录酶阳性的细胞，应进一步确认是否存在感染性逆转录病毒。 二、透射电镜检查法 取至少 1×107 个活细胞采用超薄切片法进行透射电镜观察。 三、PCR 法或其他特异性体外法 根据细胞的种属特异性，在逆转录酶活性结果不明确或不能采用逆转录酶活性测定时，可采用种属特异性的逆转录病毒检测法，如逆转录病毒 PCR 法、免疫荧光法、ELISA 法等，逆转录病毒的定量 PCR 法还可用于逆转录病毒颗粒的定量。 四、感染性试验 将待检细胞感染逆转录病毒敏感细胞，培养后检测。根据待检细胞的种属来源，须使用不同或多种的敏感细胞进行逆转录病毒感染性试验。 |
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