| 查看: 685 | 回复: 0 | ||
科研顾问_Gu新虫 (小有名气)
|
[交流]
干货分享 | 小编亲身经验讲解移液器使用方法（最详细版）
|
|
小编十年前也是在实验室摸爬滚打的一名实验员，昨天下午去实验室做了一次Q-PCR实验，自信心满满，认为这是一件小case。 今天早晨，处理实验数据发现，扩增曲线没有跑出来，和同事的数据一比对，小编完败。 小编回想昨天实验过程，开始进行问题分析，是移液枪使用不规范导致液体量取不准确？还是反应体系有问题？还是扩增温度不够？扩增时间不够？。。。 今天借着Q-PCR实验和小编的亲身经验，和大家分享下移液枪的正确使用，尽量避免实验误差。 一、首先了解移液枪的结构及使用前检查 移液枪在使用前，应进行使用前检查： 检查刻度是否在最大值；旋转旋钮，检查读数是否准确；外观是否干净；按动按钮检查是否顺畅或者有噪音；校对调整移液枪；使分配的体积在一定的规格范围内。 二、量程调节 从大体积到小体积，按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；从小体积到大体积，则先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度（继续旋转活塞按钮约1/3圈），再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。 在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。 三、枪头装配 在将枪头套上移液枪时，很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下，这时错误的做法，因为这样会导致移液枪的内部配件(如弹簧)因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。正确的方法是将移液枪(器)垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动1/4或1/2圈即可使其紧密结合。 四、预洗枪头 在我们安装了新的枪头或增加了容量值以后，应该把需要转移的液体（非粘稠液体）吸取、排放两到三次，这样做是为了让枪头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度。（粘稠类液体可以选用电动分液枪，调低吸液速度，保证移液的准确性。 除了普通液体预洗以外，在吸取有机溶剂或高挥发性液体时，挥发性气体会在白套筒室内形成负压，从而产生漏液的情况，这时就需要预洗4~6次，让白套筒室内的气体达到饱和，负压就会自动消失。 注：高温或者低温（冰点以下）液体请不要预洗！可以考虑活塞外置式移液器。 五、移液的方法 移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下2-3毫米。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴(尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时)。这时可以采取两种移液方法。 一是前进移液法。用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。 二是反向移液法。此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一停点(千万别再往下按)，取下有残留液体的枪头，弃之。 六、移液器的正确放置 使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。 |
回复此楼
10