| 查看: 733 | 回复: 3 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者一生二生三将赠送您 10 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
液相色谱方法验证 已有1人参与
|
||
|
求助各位老师，关于高效液相色谱子检测生物样品，我有几个问题想问一下 1、标准曲线一系列浓度点都是成比例增加或稀释的，但是总要从一个浓度开始操作吧，那怎么选这个对照品浓度去做标准曲线呢，每个文献都不一样，有什么依据吗？ 2、是要随便进一个对照品浓度和进样量，然后去看信噪比>10找一个差不多的浓度把这个当做定量限，再选大于这浓度3-5倍的浓度当做标准曲线最低点吗？ 3、那又怎么确保自己设置的标准曲线是可以把血浆样品待测物浓度范围包含住呢？我看有的论坛说是先估算自己样品浓度，但是这个不就是做实验要出来的结果吗，怎么自己提前预估呢？ 4、在方法学验证第一步专属性时，就要加入相对应的对照品和内标，那这时候怎么确定加入对照品个内标的量和浓度呢？有什么依据吗？ 是不是一开始就要定下来标准曲线浓度和内标浓度然后再做专属性？ 5、我试着随便选浓度和剂量，进了一个只有对照品（1mg／ml）和内标（0.1mg/ml）的混合样品，但是都杂糅在一起了，而且血浆杂峰也是在前面几分钟出，这是不是意味着我的对照品和内标都不适合这个实验了？   发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】
已经有4人回复
-
0307化学求调剂
已经有5人回复
-
材料专硕323求调剂
已经有5人回复
-
346分材料求调剂
已经有3人回复
-
售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】
已经有6人回复
-
085701环境工程317分求调剂
已经有3人回复
-
0703求调剂
已经有5人回复
-
售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】
已经有6人回复
-
接受26届调剂生
已经有16人回复
-
售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】
已经有4人回复
4楼2024-06-11 14:01:34
【答案】应助回帖
|
1. 这其实跟第三点是一个问题，就怎么确定待测物浓度范围，两种方式：一、既然做了这个样品总有设计浓度吧，就按设计浓度去算；二、拿待测物测下试试撒，不就知道了么。标曲的目标是覆盖整个待测物浓度范围，所以从哪个浓度点开始成比例增加或稀释都行，没有严格的说法，怎么方便怎么来，能达到目的就行。 2. 这个问题有点迷，信噪比跟浓度成某种线性关系是明确的，所以只要进一针已知浓度的标液，基本就能推算出定量限的浓度；至于标曲的最低浓度只要能覆盖待测物浓度就好了啊，最低就是到定量限浓度咯，如果待测物存在检不出的可能性，线性就得做到定量限。 3. 见1。 4. 加多少内标物得看内标物的响应情况，一般保证响应跟待测物接近就行。做专属性不一定要确定浓度，毕竟一般情况下专属性跟浓度不相关，但是在分离度不理想的情况下就得考虑浓度了。 5. 图上好歹标一下峰是哪个撒，如果目标峰跟内标峰分不开那是做不了内标了，目标峰跟内标峰都得有良好的分离度 |
2楼2024-06-07 11:31:13
|
谢谢老师，我进了一个空白血浆的，一个相同浓度的内标和对照品在空白血浆的，下面是色谱图，空白里第4分钟有杂峰，我的内标也是在第四个峰，这样是不是就分不开没办法证明专属性了，而且后面的对照品有点脱峰不知道是不是和杂峰没分开，请问老师这个方法还需要再优化吗，药动液相目标峰有峰宽对称性和分离度的要求吗？   发自小木虫Android客户端 |
3楼2024-06-08 15:23:43
