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小菜羊咩咩叫

新虫 (小有名气)

[交流] PCR退火温度 已有2人参与

想请问一下各位大佬，退火温度一般比引物Tm值低5度为宜。如果我的引物增加了同源臂，在pcr退火程序中，温度是根据原本引物的Tm值设定还是根据加了同源臂之后的Tm值设定呢

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1楼 2024-05-30 22:16:04
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AD_com

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
原本引物计算，后面加的不算，主要是第一轮循环，肯定是按照原本引物退火的，后面再循环其实就是总长度引物计算了，但是第一轮最重要，温度太高结合不上去就没后面什么事情了
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小菜羊咩咩叫
2楼2024-06-11 10:34:45
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Ivy尘

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
只计算和目标序列结合部分的引物碱基Tm值
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小菜羊咩咩叫
3楼2024-06-27 10:25:37
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小菜羊咩咩叫

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by AD_com at 2024-06-11 10:34:45
原本引物计算，后面加的不算，主要是第一轮循环，肯定是按照原本引物退火的，后面再循环其实就是总长度引物计算了，但是第一轮最重要，温度太高结合不上去就没后面什么事情了

谢谢大佬

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4楼2024-08-09 07:48:54
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小菜羊咩咩叫

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by Ivy尘 at 2024-06-27 10:25:37
只计算和目标序列结合部分的引物碱基Tm值

感谢解疑

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5楼2024-08-09 07:50:51
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