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如何保证接入发酵培养基的接种量一致
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新人在进行发酵提产的实验，遇到了一些问题，来问问各位大佬。 1.在从斜面往液体培养基接种时，如何保证不同的菌株的接种量一致呢，因为要比较不同菌株的差异，如果不能保证接种量相同不就没什么可比性吗？个人感觉使用接种环直接挑的误差太大了，但是也想不到什么好方法（菌株本身带有菌丝）。 2.目前标准品溶解在dmso中，可以直接拿这个溶液去跑hplc吗？如果可以要不要做一个纯dmso的对照，如果不可以的话那有什么别的方法吗？ 希望各位大佬多多指教  |
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2楼2024-05-21 03:59:54
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感谢回答。不过由于我的表述不清可能带来了一些问题。 1.这种菌有较长的菌丝并且会互相聚集在一起，无法直接计数，而且我个人觉得这种聚集状态可能会影响OD的测量。OD和细胞数一般肯定是正相关的，但是具体的比例关系要怎么量化我还是是没什么头绪。不过我也感觉按照液体积接种比较好定量，我的想法是在小的培养液中培养后离心称干重，然后根据干重加入等比例的水，这样保证每个里面菌的密度是一致的，然后再接入种子培养基，不知道这样可不可行。 2.我当时老眼昏花写错了  ，是跑HPLC，因为标准品溶解在dmso里，我的发酵液则不是，二者都要跑HPLC的，我就在想，dmso会不会对这个结果有影响。最后，不知道大佬现在是在国内还是国外，要是在国内的话注意身体啊，少熬大夜啊。 |
3楼2024-05-21 19:59:28
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wjny: 金币+5 2024-05-22 18:52:41
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wjny: 金币+5 2024-05-22 18:52:41
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1. 采用称量细胞重量的方式也是一种常见的手段。如果要采用称量法，尽量把细胞富集到一个比较高的浓度，把细胞的重量占比提高以后能够减小因为离心后取不净的上清液带来的质量上的误差。至于称量后加水调节细胞浓度，如果体积不大，是可以的。不过我建议不如加新鲜的种子培养液来调节，这样就不会给体系带来改变。 2. 了解了。如果你是打算直接把离心后回收的发酵液上HPLC的柱子，我建议把你的标准品用新鲜的发酵用培养液进行一个大比例的稀释，得到一个DMSO的体积可以忽略的在新鲜培养液里的标准品溶液。如果标准品浓度不够进行大比例稀释，我个人认为DMSO仅作为样品的溶剂不会对HPLC的结果造成影响。因为上柱后的样品都是使用同样的A，B液进行洗脱。 我在国外呢，有时差，  不熬夜 |
4楼2024-05-22 02:11:49
5楼2024-05-22 19:03:29