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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 请教pMAL-c2e载体蛋白表达

请教各位。谁用过pMAL-c2e载体在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导蛋白表达,具体步骤怎么样的?越详细越好!摇菌转速多少?IPTG浓度?不胜感激!
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一个人可以不成功,但不可以不成长!
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

一个人可以不成功,但不可以不成长!
2楼2009-10-22 17:48:11
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)

怎么没有人回答!其他质粒的,只要是IPTG诱导表达的也可以!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
3楼2009-10-23 09:15:41
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konggy

银虫 (正式写手)

★ ★ ★
Anson1358(金币+3,VIP+0):谢谢 10-23 10:28
转速250就差不多了,IPTG你可以尝试0.1mM-0.3mM,这个质粒说明说上应该有介绍,诱导时间要看诱导温度定,37度3个小时就差不多
4楼2009-10-23 10:17:59
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子


louyiceng(金币+1,VIP+0): 12-6 15:52
请翻到分子克隆中文版(第三版)103页  上面说的非常详细。
可以用QQ找我……
5楼2009-10-23 10:33:10
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Anson1358

铁杆木虫 (著名写手)


louyiceng(金币+1,VIP+0): 12-6 15:52
引用回帖:
Originally posted by 红多多 at 2009-10-23 10:33:
请翻到分子克隆中文版(第三版)103页  上面说的非常详细。

楼上的分子克隆第三版103页是用X-gal和IPTG筛选细菌菌落,我说的是IPTG诱导外源基因的表达,你没有理解我的意思!
一个人可以不成功,但不可以不成长!
6楼2009-10-23 11:03:28
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


Anson1358(金币+1,VIP+0):我也看到啦,谢谢 10-23 15:13
分子克隆中文版(第三版)下册1228页。诱导不同的蛋白情况不太一样,你可以诱导4小时,200rpm试试。
7楼2009-10-23 15:04:43
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