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plantst5928

铜虫 (小有名气)

[交流] 求助PCR问题

大家做菌液PCR的时候一都是什么体系?循环数多少?是不是循环数太多容易有非特异扩增,大家一般多少循环?

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-22 at 15:49 ]
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695

木虫 (职业作家)


生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 10-22 20:57
我的是60度25个循环
2楼2009-10-21 23:43:35
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 10-22 18:57
Ta:  3μL(100umol/L)
Ts:  3μL(100umol/L)
Taq Buffer:  10μL(10×)
dNTP:  10μL(2.5mM)
MgCl 2:  4μL(25mM)
Taq 酶:  1μL(2.5U/μL)
水:  68μL
PCR扩增体系:  100μL
验证的话25个cycle足够了。
3楼2009-10-22 15:00:03
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

1ul菌液...
4楼2009-10-22 15:05:28
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jjlbest

木虫 (著名写手)


生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 10-22 20:57
和正常的PCR体系及扩增的循环数一样啊,没有什么区别的,一般能不能出现为特异性条带和引物的特异性有关系,和循环数的关系不大。
5楼2009-10-22 18:35:41
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q307078056

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
貌似20ul的体系2ul的模板量进行40循环吧..
人生不是一种享受,而是一桩沉重异常的工作
6楼2009-10-22 21:05:38
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zhy0790707

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
N个循环产生2的N次方个DNA,循环数多少只会使产物量多少不 一样,一般30个循环,也有25的,多了没必要
7楼2009-10-23 12:32:22
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