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基地行商

铁虫 (小有名气)

[求助] CAR-T细胞杀伤实验求助

最近做了一个CAR-T细胞,然后做体外细胞杀伤实验验证其效果,CAR-T有杀伤效果,但是对照的T细胞组也出现了杀伤效果,两次实验都是这种结果,不知道问题出在哪里

实验流程是这样的:
第一天:从健康成年人采集血液,分离出PBMC,使用XVIVO15培养基(5%自体血清 +1000UI/mL 白介素2)培养到第二天
第二天:将培养的PBMC平分成两份,分别加入与细胞数量相等的CD3/CD28磁珠(gibco),继续培养到第三天
第三天:一分PBMC加入含car的慢病毒,moi为8,polybrene 8μg/mL,另一份PBMC不加任何东西,都放在离心机中 2000g 32℃ 离心2小时,离心结束后直接放回培养箱
第四天:将两份细胞吹匀或使用刮刀,分别收集后离心,然后重新使用XVIVO15重悬,继续培养
第五六天:根据培养基消耗状态,补充培养基
第七天:除去细胞中的CD3/CD28磁珠,继续培养
第八天:收集足够的T细胞和CAR-T细胞用于细胞杀伤实验(RTCA法)


我个人感觉问题出在去除CD3/CD28磁珠到细胞杀伤实验的时间太短,磁珠加强了T细胞的非特异杀伤
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