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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » lowry法用自己配制的试液甲检测蛋白浓度偏高怎么回事？
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)

[交流] lowry法用自己配制的试液甲检测蛋白浓度偏高怎么回事？

最近做蛋白含量测定，以前用的Folin-酚试剂盒测蛋白的含量比较正常，但因为试剂甲用完后，自己按方法配置，但是测出蛋白含量结果偏高，不知道为什么，请高手解释！再次深表感激！

[ Last edited by amisking on 2009-10-21 at 22:23 ]
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1楼 2009-10-21 16:22:07
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yangjjie

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
woxinfeiyang(金币+5,VIP+0):稀释倍数对，不知道是哪方面影响了，谢谢啊，对Flourstar还不太了解！要了解一下 10-21 22:12
稀释倍数正确不？还有枪最好一直用自己的，别换。
你用Flourstar进行蛋白含量测定，以检查准确性。
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2楼2009-10-21 17:11:42
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nn0808

银虫 (小有名气)
★ ★
woxinfeiyang(金币+2,VIP+0):谢谢关注 10-21 22:13
试剂换了之后必须重新做标准曲线,你做了吗?
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3楼2009-10-21 18:08:57
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by nn0808 at 2009-10-21 18:08:
试剂换了之后必须重新做标准曲线,你做了吗?

重新做了啊！每次都是重新做，以前是用的试剂盒，试剂甲用完后是自己按照说明说上的配方配置的！做标准曲线都是和做样品是一块做的！
谢谢您的关注！
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4楼2009-10-21 22:06:52
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woxinfeiyang

木虫 (正式写手)
用考马斯亮蓝法测定壳聚糖中蛋白的精密度老是不好，是不是样品粘度太大而混合不均匀还是其中蛋白含量偏低<2%，一般在0.5~1.0%之间。拜托高手回帖，多谢了！

[ Last edited by woxinfeiyang on 2009-11-4 at 15:32 ]
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5楼2009-11-03 09:57:57
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
woxinfeiyang(金币+15,VIP+0):多谢指点，不过在试剂盒里相对试剂乙，世界甲太少了，试剂乙单配还不好配，只有自配试剂甲再配合试剂盒里试剂乙用了，非常感谢您的指点，谢谢！ 11-4 15:34
问题很有可能出在你配的溶液当中，可能你配的溶液导致你整个标准曲线下移，结果使测定值偏高，对于这种情况你可以用做标准曲线的蛋白来测试一下标准曲线的正确性。另外lowry法对溶剂要求很高，对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰Lowry反应，另外你配置溶液PH也很重要，还有单单配甲液，而乙液用试剂盒的，这样恐怕不妥吧，建议你要么都自己配，要么都用试剂盒的。（1）试剂甲：

　　（A） 10克 Na2CO3，2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠 （KNaC4H4O6·4H2O）。溶解于500毫升蒸馏水中。

　　（B） 0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。

　　（2）试剂乙：

　　在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克 硫 酸 锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准NaOH滴定，酚酞作指示剂，然后适当稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1N左右。

　　（3）标准蛋白质溶液：

　　精确称取结晶牛血清清蛋白或 g—球蛋白，溶于蒸馏水，浓度为250 mg/ml左右。牛血清清蛋白溶于水若混浊，可改用0.9% NaCl溶液。
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可以用QQ找我……
6楼2009-11-03 10:51:43
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