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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎么样在质粒里加入一个酶切位点？
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qiqi_cpu

木虫 (正式写手)

[交流] 怎么样在质粒里加入一个酶切位点？

怎么样在质粒里加入一个酶切位点。比如pCDNA3.1 (-) B加如Bgl II 酶切位点？哪位高手有这方面的经验，帮帮忙呀
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1楼 2009-10-21 09:39:58
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paraake

铜虫 (初入文坛)
选好位置，设计引物，质粒PCR。当然引物里要有你要的酶切位点～

需要了解的东西：质粒PCR（如何P出质粒）、PCR引物设计
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2楼2009-10-21 10:19:41
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
http://www.neb-china.com/jishuziliaoliebiao.aspx?leibie1=060000
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3楼2009-10-21 10:22:24
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红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子
呵呵 这个比较麻烦，可以将质粒酶切开以后对加上自己合成的街头然后在对接起来，这个要注意的就是质粒本来是有负超螺旋的结构，所以不建议用于调控性表达质粒。还有方法就是想办法PCR诱变，这个方法很多，找本好点的基因工程的书上有详细方法
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可以用QQ找我……
4楼2009-10-21 10:26:40
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bioxixi

木虫 (著名写手)
还不如换个质粒或者换个酶切位点来的简单
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5楼2009-10-21 10:44:54
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Entrez1110

可以合成含BGlII酶切位点的DNA片段，DNA片段两端设为质粒插入部位的相应酶切位点即可！
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6楼2009-10-21 15:00:42
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houcaixia

金虫 (小有名气)
我觉得可以设计一个引物，是引物上面含有两个酶切位点，内侧的含有Bgl II的酶切位点，外侧含有pCDNA3.1 (-) B上面的一个酶切位点，然后用这个引物扩增基因，在做连接就可以了。这样的话引物的长度可能会长点。
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7楼2009-10-21 15:14:39
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經天

铁杆木虫 (著名写手)
前段时间正好设计过一个：
简单跟你说一下，你先看看你的质粒找一个单酶切位点，切开后插入含有Bgl II酶切位点的一小段序列，这段序列两端粘性末端必须是你上面的酶切位点一致，然后再连上就行了。
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
8楼2009-10-21 17:13:21
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zier1011

木虫 (著名写手)
在引物中设计酶切位点，质粒PCR
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花还香香的
9楼2009-10-21 17:54:56
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yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-10-21 10:44:
还不如换个质粒或者换个酶切位点来的简单

正解
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10楼2009-10-21 18:15:02
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