24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1625  |  回复: 10
当前主题已经存档。

qiqi_cpu

木虫 (正式写手)

[交流] 怎么样在质粒里加入一个酶切位点?

怎么样在质粒里加入一个酶切位点。比如pCDNA3.1 (-) B加如Bgl II 酶切位点?哪位高手有这方面的经验,帮帮忙呀
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

paraake

铜虫 (初入文坛)

选好位置,设计引物,质粒PCR。当然引物里要有你要的酶切位点~

需要了解的东西:质粒PCR(如何P出质粒)、PCR引物设计
2楼2009-10-21 10:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

3楼2009-10-21 10:22:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红多多

木虫 (正式写手)

版筑饭牛的日子

呵呵 这个比较麻烦,可以将质粒酶切开以后对加上自己合成的街头然后在对接起来,这个要注意的就是质粒本来是有负超螺旋的结构,所以不建议用于调控性表达质粒。还有方法就是想办法PCR诱变,这个方法很多,找本好点的基因工程的书上有详细方法
可以用QQ找我……
4楼2009-10-21 10:26:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)

还不如换个质粒或者换个酶切位点来的简单
5楼2009-10-21 10:44:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Entrez1110

可以合成含BGlII酶切位点的DNA片段,DNA片段两端设为质粒插入部位的相应酶切位点即可!
6楼2009-10-21 15:00:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

houcaixia

金虫 (小有名气)

我觉得可以设计一个引物,是引物上面含有两个酶切位点,内侧的含有Bgl II的酶切位点,外侧含有pCDNA3.1 (-) B上面的一个酶切位点,然后用这个引物扩增基因,在做连接就可以了。这样的话引物的长度可能会长点。
7楼2009-10-21 15:14:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

經天

铁杆木虫 (著名写手)

前段时间正好设计过一个:
简单跟你说一下,你先看看你的质粒找一个单酶切位点,切开后插入含有Bgl II酶切位点的一小段序列,这段序列两端粘性末端必须是你上面的酶切位点一致,然后再连上就行了。
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
8楼2009-10-21 17:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zier1011

木虫 (著名写手)

在引物中设计酶切位点,质粒PCR
花还香香的
9楼2009-10-21 17:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yzhang1986

铁杆木虫 (文坛精英)

优秀版主

引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-10-21 10:44:
还不如换个质粒或者换个酶切位点来的简单

正解
10楼2009-10-21 18:15:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qiqi_cpu 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 8/400 2026-05-24 11:58 by 晓晓爱翠翠
[考博] 云南大学材料与能源学院解琳课题组钙钛矿博士招生 +4 光伏爱好者 2026-05-17 7/350 2026-05-24 10:20 by 光伏爱好者
[基金申请] 西安交大新媒学院副院长用撤稿论文结题 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:16 by kudofaye
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路! +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[基金申请] 揭秘青基评审内幕:几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[论文投稿] 投稿求助,期刊 +4 希冀,有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀,有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页,违规吗?会被低分嘛? +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[有机交流] 反应很差,大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博,可以边工作边读全日制嘛? 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
请填处理意见