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吐温20在WB中的作用是什么？已有1人参与
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Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体，对于TBST的配方也基本上相差不多，其中配方中就有一种组分是Tween-20，一种黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂，Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用呢？ 1、Tween-20 首先了解一下什么是Tween-20。Tween-20也写作Tween 20，也称Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名为吐温-20或吐温20。Tween-20为黄色或琥珀色澄明的油状液体，具有特殊的臭气和微弱苦味。分子中含有较多的亲水性基团，可与水、甲醇、乙醇、异丙醇、丙二醇、乙二醇、棉子油等混溶。是常用的非离子性去垢剂。 2、Tween-20的应用 Tween-20是一种非离子型表面活性剂。用途为水包油乳化剂、可用作溶剂、扩散剂、稳定剂、润滑剂和抗静电剂等。气相色谱固定液(最高使用温度120℃)分离分析挥发油、脂肪酸酯、醇、酮和卤化物。 3、Tween-20作用 Western blot的操作流程中大部分都用到TBST洗液，而且还是封闭，一抗二抗孵育这种比较关键的步骤。通常Tween-20作为一种非离子型表面活性剂，效果和SDS、BSA作用差不多，主要是封闭膜上蛋白的非结合位点，以降低背景，增强抗体的特异性结合。理想的封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的表位、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。如果脱脂牛奶封闭效果不好可以提高吐温浓度。 在WB洗液里的吐温是和BSA一样，对抗原抗体蛋白提供保护作用，同时因为是表面活性剂（司盘加成亲水的环氧乙烷基团后的化合物），可以减少抗体对抗原的非特异性作用，用于洗脱未结合的抗体、减少非特异性结合。Tween-20是我们用TBST的时候Tween-20得用量是0.5ml/L，不加SDS。 |
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2楼2024-03-29 09:21:43