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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助各位大佬一个 qPCR 的多重实验问题
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Lixy9577

新虫 (小有名气)
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求助各位大佬一个 qPCR 的多重实验问题
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请问在做 qPCR 的多重设计时，各个通道的荧光强度高低不一致改变体系可以调整吗？如果可以请问需要调整哪些参数啊？是 dNTP 还是 Mg2+ 离子

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1楼 2024-03-22 13:51:48
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
荧光强度不同难到不是正常的吗？毕竟不同片段扩增效率也不同

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10楼2024-03-28 14:22:04
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美亿美生物

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8楼2024-03-22 16:20:04
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Lixy9577

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by HK驱魔者 at 2024-03-28 14:22:04
荧光强度不同难到不是正常的吗？毕竟不同片段扩增效率也不同

但是如果设计多重 qPCR 的话，最好是不是要 Ct 值和荧光强度都相差不大啊？荧光强度不同是可以的吗?

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11楼2024-03-29 09:27:42
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HK驱魔者

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
11楼: Originally posted by Lixy9577 at 2024-03-29 09:27:42
但是如果设计多重 qPCR 的话，最好是不是要 Ct 值和荧光强度都相差不大啊？荧光强度不同是可以的吗?
...

Ct值和基因拷贝数有关系，你担心有影响可以设置单个基因的检测体系作为对照，然后模板量相同，看看和多重qpcr体系有无明显差距。个人意见，其实我也没做过多重的，只是从原理角度提出建议。

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Lixy9577
12楼2024-03-31 23:22:08
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BLBLgb

禁虫 (小有名气)
★
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13楼2024-04-02 13:49:41
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Lixy9577

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
12楼: Originally posted by HK驱魔者 at 2024-03-31 23:22:08
Ct值和基因拷贝数有关系，你担心有影响可以设置单个基因的检测体系作为对照，然后模板量相同，看看和多重qpcr体系有无明显差距。个人意见，其实我也没做过多重的，只是从原理角度提出建议。
...

好的，谢谢啦。做单重时候 1000copies/ul 的 Ct 值都相差不大的，多重也没差多少，但是多重的时候出现了荧光强度相差很大的问题，想把它们调整的差不多

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14楼2024-04-02 15:52:55
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weizhe342楼
2024-03-22 13:54   回复  
Lixy9577(金币+3): 谢谢参与
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tzynew3楼
2024-03-22 13:55   回复  
Lixy9577(金币+5): 谢谢参与
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1592364784楼
2024-03-22 14:04   回复  
Lixy9577(金币+3): 谢谢参与
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jinchengzi5楼
2024-03-22 15:44   回复  
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科研战神·王6楼
2024-03-22 15:58   回复  
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云在青天7楼
2024-03-22 15:59   回复  
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Lixy95779楼
2024-03-22 17:14   回复  
引用回帖:
8楼: Originally posted by 美亿美生物 at 2024-03-22 16:20:04 祝你幸福

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