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求助各位大佬一个 qPCR 的多重实验问题
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请问在做 qPCR 的多重设计时,各个通道的荧光强度高低不一致改变体系可以调整吗?如果可以请问需要调整哪些参数啊?是 dNTP 还是 Mg2+ 离子
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荧光强度不同难到不是正常的吗?毕竟不同片段扩增效率也不同
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2024-03-28 14:22:04
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10楼
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HK驱魔者
at 2024-03-28 14:22:04
荧光强度不同难到不是正常的吗?毕竟不同片段扩增效率也不同
但是如果设计多重 qPCR 的话,最好是不是要 Ct 值和荧光强度都相差不大啊?荧光强度不同是可以的吗?
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2024-03-29 09:27:42
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Lixy9577
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但是如果设计多重 qPCR 的话,最好是不是要 Ct 值和荧光强度都相差不大啊?荧光强度不同是可以的吗?
...
Ct值和基因拷贝数有关系,你担心有影响可以设置单个基因的检测体系作为对照,然后模板量相同,看看和多重qpcr体系有无明显差距。个人意见,其实我也没做过多重的,只是从原理角度提出建议。
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12楼
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HK驱魔者
at 2024-03-31 23:22:08
Ct值和基因拷贝数有关系,你担心有影响可以设置单个基因的检测体系作为对照,然后模板量相同,看看和多重qpcr体系有无明显差距。个人意见,其实我也没做过多重的,只是从原理角度提出建议。
...
好的,谢谢啦。做单重时候 1000copies/ul 的 Ct 值都相差不大的,多重也没差多少,但是多重的时候出现了荧光强度相差很大的问题,想把它们调整的差不多
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14楼
2024-04-02 15:52:55
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tzynew
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云在青天
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Lixy9577
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8楼
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美亿美生物
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