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andia

木虫 (著名写手)

[交流] 鲑鱼精DNA处理

有没有哪位大侠了解粉末的鲑鱼精DNA怎么处理?
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

看你做什么用途了,一般用tris缓冲液溶解
爱人者被爱,敬人者人敬
2楼2009-10-18 09:20:37
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andia

木虫 (著名写手)

就是最普通的处理,据说是要超声波断裂什么的,具体过程能说说嘛?
3楼2009-10-18 09:22:22
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

比如做毕赤酵母氯化锂转化用的鲑鱼精DNA就用pH8.0的tris缓冲液溶解啊
爱人者被爱,敬人者人敬
4楼2009-10-18 09:55:15
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bellams


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by andia at 2009-10-18 09:12:53:
有没有哪位大侠了解粉末的鲑鱼精DNA怎么处理?

我最近也想用氯化锂的方法做转化,但是不知道鲑鱼精DNA要怎么处理,看到网页上有一种处理方法,也不是很明白,想请教你一下。
鲑鱼精DNA

说明:生化研究。
CAS#:9007-49-2
外观:白色线状
特性:Linkage:Formerly listed as Type III
溶解性:溶于水,参考浓度2mg/ml
储存条件:2-8℃
From Sigma D1626
Salmon DNA 的配制:
组份浓度10 mg/ml Salmon DNA ;配制量约100 ml
配制方法:
1. 称取鲑鱼精DNA 2 g置于500 ml烧杯中,加入约200 ml的TE Buffer。
2. 用磁力搅拌器室温搅拌2~4小时,溶解后加入4 ml的5 M NaCl,
使其终浓度为0.1 M。
3. 用苯酚和苯酚/氯仿各抽提1次。4. 回收水相溶液后,使用17号皮下注射针头快速吸打溶液约20
次,以切断DNA。
5. 加入2倍体积的预冷乙醇进行乙醇沉淀。
6. 离心回收DNA后,溶解于100 ml的去离子水中,测定溶液的OD260值。
7. 计算溶液的DNA浓度后,稀释DNA溶液至10 mg/ml。
8. 煮沸10分钟后,分装成小份(1 ml/份)。-20℃保存。
9. 使用前在沸水浴中加热5分钟后,迅速冰浴冷却。

第3步中苯酚和氯仿的用量是多少啊,我查了很久,都没找到。
还有第五步中的乙醇用的是无水乙醇吗?
请做过这个实验的大侠指点一下。
5楼2010-03-23 09:14:16
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