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关于细菌氧气摄取速率的测量
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本人需要测量细菌对氧气摄取速率(Measurement of oxygen utilization) 手头资料比较少，懂得不多，希望大家能补充一些 可以发到我的邮箱cancanyeah@yahoo.com.cn我会整理出来及时发帖的~ 先分享一下我自己找的资料吧 细胞的氧气利用速率采用极谱法测量[2]，测量仪器是Yellow Springs Model 55 Oxygen Monitor。 (1) （1）根据说明书使用氧气饱和的0.1M磷酸钾缓冲液（PH7.5）进行检测器（Monitor）的校准（注：25℃下氧气浓度为250mmol/L，32℃下氧气浓度为233mmol/L）。 (2) （2）在室温下搅拌缓冲液至少3h，使空气充分溶解（buffer was stirred at room temperature for at least 3 h in order to produce air saturation.）。E. coli 和P. aeruginosa样品所在水环境的温度分别是25℃和32℃，通过与检测器（Monitor）相连的恒温调节器（thermostat）控制温度。 (3) （3）往样品细胞中加入4ml缓冲液并搅拌4min，使温度均匀。此时插入检测器的探头，将recorder调成100%氧气浓度。 (4) （4）间隔一定时间对细胞氧气利用进行测量，将1ml细胞培养物室温下离心10min，并用1mL 0.1M磷酸缓冲液（PH7.5）将沉淀洗涤一次，重悬于1mL 0.1M磷酸缓冲液（PH7.5） (5) （5）向样品中加入3mL含饱和空气的磷酸缓冲液，震荡3min，然后将1mL细胞悬液加到缓冲液中并震荡10min使温度均衡。4mL细胞悬液中氧气浓度随着时间产生的百分比变化被测量。每个细胞每分钟氧气摄入速率（oxygen uptake rate）通过下式计算： R=X mmoles/L ×(4/1000)l ×D/VT, 其中X=250（25℃）或者233（32℃） V is the cell number per milliliter (from the viable cell count) determined by titering a sample of cells taken at the same time as each sample used for oxygen uptake determination;（这句话不太会翻译。麻烦懂得人帮忙翻译下） D is the decrease of oxygen concentration in fraction of 1.0;（这句话不太会翻译。麻烦懂得人帮忙翻译下） T氧气消耗时间 公式中V和D所表示的意思我不太懂，附有英文原文，希望大家给翻译下~ 共同进步~ [ Last edited by amisking on 2009-10-17 at 16:18 ] |
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