应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒酶切求教
81/1返回列表
查看: 486  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

695

木虫 (职业作家)

[交流] 质粒酶切求教

昨天我尝试了两次酶切我的5RACE质粒，按序列的话应该切出475和 3111两条带，结果切出来的是200左右的3000-3500之间的两条带，但是后边这个带比我的质粒略小，质粒是3586，这个可能是什么原因呢，我用的1%胶，希望大家给点指导，多谢了


酶切体系是
buffer 1
xhoi    0.3
psti     0.3
ddH2O 7.4
DNA    1

[ Last edited by 695 on 2009-10-16 at 15:40 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-10-16 15:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

46437772

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连数都算不清楚，当然切不出想要的带啦
言归正传，用什么酶切得？你的酶切位点确信么？具体酶切体系情况怎么样？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-10-16 15:19:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 46437772 at 2009-10-16 15:19:
连数都算不清楚，当然切不出想要的带啦
言归正传，用什么酶切得？你的酶切位点确信么？具体酶切体系情况怎么样？

呵呵，你可能说475+3111的事吧，我是在NTI vector上作的，酶切3个小时，看着条带已经没切充分了，体系已附上，多谢指教
赞一下 回复此楼
3楼2009-10-16 15:25:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

46437772

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 10-16 20:34
载体质粒的全序列都测定了？还是你自己用vector拼接构建的？最好把你的质粒选个位置，设计引物测个序，和你构建的序列比对一下，确定一下是不是vector中的序列有问题。

选好测序位点，只测一个反应就能验证问题
赞一下(21人) 回复此楼
4楼2009-10-16 17:11:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 46437772 at 2009-10-16 17:11:
载体质粒的全序列都测定了？还是你自己用vector拼接构建的？最好把你的质粒选个位置，设计引物测个序，和你构建的序列比对一下，确定一下是不是vector中的序列有问题。

选好测序位点，只测一个反应就能验证问题

这是个已知载体，我用的是pGME T vector,我5RACE片段已转化进去了，现在要做的是就是利用全序列上唯一的两个酶切位点XHOI和PSTI进行酶切，切成线性质粒，然后再与我的3RACE片段做连接
赞一下 回复此楼
5楼2009-10-16 17:26:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

46437772

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加QQ说吧，这个交流费劲
97250372
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-10-16 19:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zier1011

木虫 (著名写手)
测个序确定一下有没有存在其他的没切位点吧
赞一下 回复此楼
花还香香的
7楼2009-10-17 22:59:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-10-17 22:59:
测个序确定一下有没有存在其他的没切位点吧

这个已经是已知序列了，是RACE得到的序列，连接上去之后会测序的，现在继续做下去了，等到有结果了再向你汇报啊
赞一下 回复此楼
8楼2009-10-18 00:42:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 695 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 河北省自然科学基金 +5 Peterchao 2026-05-18 8/400 2026-05-24 11:58 by 晓晓爱翠翠
[教师之家] 论文撤稿了 +3 bjvtcliu 2026-05-24 5/250 2026-05-24 10:06 by Equinoxhua
[教师之家] 某211大学教师把个人教师官方主页改成:我跑了我跑了我跑了!官宣跑路！ +4 zju2000 2026-05-21 5/250 2026-05-24 09:35 by songwz
[考博] 26/27申博自荐 10+4 ZXW0202 2026-05-22 9/450 2026-05-24 08:47 by bjvtcliu
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 hvkbtfonbv 2026-05-23 3/150 2026-05-24 08:01 by 9ps9vgkqva
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 pmo95bazuy 2026-05-23 7/350 2026-05-24 06:35 by fpo5ljpv91
[基金申请] 揭秘青基评审内幕：几个A才能顺利中标 +3 国自然国社科中 2026-05-23 4/200 2026-05-23 15:37 by 2000zf36392
[基金申请] 青B发送上会通知了吗 +5 chemBioBro 2026-05-22 7/350 2026-05-23 12:35 by zhuifengzhy
[考博] 博士申请 +3 焦晓明 2026-05-21 3/150 2026-05-23 11:26 by mlc840311
[论文投稿] 投稿求助，期刊 +4 希冀，有书读 2026-05-20 8/400 2026-05-22 10:16 by 希冀，有书读
[文学芳草园] 献血感触 +7 呀呀好傻 2026-05-19 13/650 2026-05-21 20:15 by 呀呀好傻
[基金申请] 面上本子正文33页，违规吗？会被低分嘛？ +14 1234567wang 2026-05-17 16/800 2026-05-21 17:58 by 脆脆的饼干
[基金申请] 国自然评分 +4 无名者登山 2026-05-20 5/250 2026-05-21 16:35 by swuq
[基金申请] 国自然上会要求 +7 无名者登山 2026-05-18 11/550 2026-05-21 15:50 by draco1987
[基金申请] 提交了我也来说说感想 +9 fummck 2026-05-20 10/500 2026-05-21 14:17 by draco1987
[基金申请] 评审有感 +15 popular289 2026-05-18 26/1300 2026-05-21 10:35 by 西葫芦炒鸡蛋
[有机交流] 反应很差，大量原料没有反应 5+3 Mr.Zot 2026-05-19 8/400 2026-05-20 22:19 by Equinoxhua
[考博] 如果工作了想读博，可以边工作边读全日制嘛？ 30+3 铁达火车 2026-05-18 5/250 2026-05-20 09:33 by tfang
[考博] 博士申请 +5 星…… 2026-05-18 6/300 2026-05-18 23:49 by 糊糊涂涂好
[硕博家园] 我在等一个没有答案的答案 +3 Love_MH 2026-05-17 3/150 2026-05-18 02:22 by 竹林孤影
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭