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695

木虫 (职业作家)

[交流] 质粒酶切求教

昨天我尝试了两次酶切我的5RACE质粒,按序列的话应该切出475和 3111两条带,结果切出来的是200左右的3000-3500之间的两条带,但是后边这个带比我的质粒略小,质粒是3586,这个可能是什么原因呢,我用的1%胶,希望大家给点指导,多谢了


酶切体系是
buffer 1
xhoi    0.3
psti     0.3
ddH2O 7.4
DNA    1

[ Last edited by 695 on 2009-10-16 at 15:40 ]
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46437772

木虫 (小有名气)


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连数都算不清楚,当然切不出想要的带啦
言归正传,用什么酶切得?你的酶切位点确信么?具体酶切体系情况怎么样?
2楼2009-10-16 15:19:45
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695

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by 46437772 at 2009-10-16 15:19:
连数都算不清楚,当然切不出想要的带啦
言归正传,用什么酶切得?你的酶切位点确信么?具体酶切体系情况怎么样?

呵呵,你可能说475+3111的事吧,我是在NTI vector上作的,酶切3个小时,看着条带已经没切充分了,体系已附上,多谢指教
3楼2009-10-16 15:25:04
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46437772

木虫 (小有名气)

★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 10-16 20:34
载体质粒的全序列都测定了?还是你自己用vector拼接构建的?最好把你的质粒选个位置,设计引物测个序,和你构建的序列比对一下,确定一下是不是vector中的序列有问题。

选好测序位点,只测一个反应就能验证问题
4楼2009-10-16 17:11:13
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695

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by 46437772 at 2009-10-16 17:11:
载体质粒的全序列都测定了?还是你自己用vector拼接构建的?最好把你的质粒选个位置,设计引物测个序,和你构建的序列比对一下,确定一下是不是vector中的序列有问题。

选好测序位点,只测一个反应就能验证问题

这是个已知载体,我用的是pGME T vector,我5RACE片段已转化进去了,现在要做的是就是利用全序列上唯一的两个酶切位点XHOI和PSTI进行酶切,切成线性质粒,然后再与我的3RACE片段做连接
5楼2009-10-16 17:26:28
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46437772

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
加QQ说吧,这个交流费劲
97250372
6楼2009-10-16 19:59:39
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zier1011

木虫 (著名写手)

测个序确定一下有没有存在其他的没切位点吧
花还香香的
7楼2009-10-17 22:59:05
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695

木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-10-17 22:59:
测个序确定一下有没有存在其他的没切位点吧

这个已经是已知序列了,是RACE得到的序列,连接上去之后会测序的,现在继续做下去了,等到有结果了再向你汇报啊
8楼2009-10-18 00:42:17
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