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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒酶切求教
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695

木虫 (职业作家)

[交流] 质粒酶切求教

昨天我尝试了两次酶切我的5RACE质粒，按序列的话应该切出475和 3111两条带，结果切出来的是200左右的3000-3500之间的两条带，但是后边这个带比我的质粒略小，质粒是3586，这个可能是什么原因呢，我用的1%胶，希望大家给点指导，多谢了


酶切体系是
buffer 1
xhoi    0.3
psti     0.3
ddH2O 7.4
DNA    1

[ Last edited by 695 on 2009-10-16 at 15:40 ]
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1楼 2009-10-16 15:07:37
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46437772

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
连数都算不清楚，当然切不出想要的带啦
言归正传，用什么酶切得？你的酶切位点确信么？具体酶切体系情况怎么样？
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2楼2009-10-16 15:19:45
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 46437772 at 2009-10-16 15:19:
连数都算不清楚，当然切不出想要的带啦
言归正传，用什么酶切得？你的酶切位点确信么？具体酶切体系情况怎么样？

呵呵，你可能说475+3111的事吧，我是在NTI vector上作的，酶切3个小时，看着条带已经没切充分了，体系已附上，多谢指教
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3楼2009-10-16 15:25:04
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46437772

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 10-16 20:34
载体质粒的全序列都测定了？还是你自己用vector拼接构建的？最好把你的质粒选个位置，设计引物测个序，和你构建的序列比对一下，确定一下是不是vector中的序列有问题。

选好测序位点，只测一个反应就能验证问题
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4楼2009-10-16 17:11:13
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 46437772 at 2009-10-16 17:11:
载体质粒的全序列都测定了？还是你自己用vector拼接构建的？最好把你的质粒选个位置，设计引物测个序，和你构建的序列比对一下，确定一下是不是vector中的序列有问题。

选好测序位点，只测一个反应就能验证问题

这是个已知载体，我用的是pGME T vector,我5RACE片段已转化进去了，现在要做的是就是利用全序列上唯一的两个酶切位点XHOI和PSTI进行酶切，切成线性质粒，然后再与我的3RACE片段做连接
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5楼2009-10-16 17:26:28
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46437772

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加QQ说吧，这个交流费劲
97250372
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6楼2009-10-16 19:59:39
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zier1011

木虫 (著名写手)
测个序确定一下有没有存在其他的没切位点吧
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花还香香的
7楼2009-10-17 22:59:05
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695

木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by zier1011 at 2009-10-17 22:59:
测个序确定一下有没有存在其他的没切位点吧

这个已经是已知序列了，是RACE得到的序列，连接上去之后会测序的，现在继续做下去了，等到有结果了再向你汇报啊
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8楼2009-10-18 00:42:17
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