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LuckyZhou2铁虫 (小有名气)
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[交流]
如果核酸会说话之仪器篇：MerMade！
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在新冠疫情爆发后，mRNA疫苗的高效研发带动了整个核酸药物领域的高速发展，受到越来越多人的关注。国内外资本瞄准其庞大的市场空间及发展潜力，纷纷布局，核酸药物的研发成为全球最炙手可热的领域之一。与传统的小分子药物和抗体药物相比，核酸药物最大的优点是研发时间大幅缩短，只需通过核酸序列设计的改变，就可以快速研发出不同的药物。 从 1983年 穆利斯发明 PCR 技术【点此了解析析与 PCR 之父凯利·穆利斯的故事】，到 1998年 第一款小核酸药物获批，再到 2023 年 mRNA 疫苗技术主要贡献者斩获诺贝尔奖，这些看似不相关领域的发展却都离不开一项关键技术的推动：寡核苷酸固相合成 固相寡核苷酸合成原理 具体步骤如下： 脱DMT 用三氯乙酸(TCA)脱去连接在固相载体 CPG 上的羟基保护基团 DMT (二甲氧基三苯基)，获得游离的 5’- 羟基端，以供下一步缩合反应。 活化偶联 将亚磷酰胺单体与四唑类活化剂混合形成亚磷酰胺四唑活性中间体并进入合成柱，与 CPG 上游离的 5’- 羟基亲和发生缩合反应，此时合成的寡核苷酸链延长一个碱基。 盖帽 缩合反应后为了防止 CPG 上未参与反应的 5’- 羟基在随后的循环反应中被延伸，避免产生 n-1 杂质，常用乙酰化试剂（如乙酸酐和 N- 甲基咪唑混合物）来封闭此端羟基。 氧化 由于偶联生成的三价亚磷酸三脂键仍不稳定，易被酸、碱水解，常用碘的四氢呋喃溶液将三价磷氧化为五价磷，得到稳定的寡核苷酸。 那么，如果实现这一连串的步骤呢？DNA 合成仪就是将上述一系列化学合成过程进行自动化，精准可控的设备。 BioAutomation 自 1999 年成立以来，一直是全球领先的核酸合成仪制造商，现作为 LGC Biosearch Technologies 的一部分，二十多年来其 MerMade 系列核酸合成仪深受众多国内外头部分子诊断企业、寡核苷酸合成服务商及核酸药物公司的信赖并被广泛应用。 MerMade核酸合成仪前沿应用 关于 MerMade 的应用，早在1998 年 Prof Rayner 等就在核心期刊《Genome Research》发表了通过 MerMade 进行高通量的 Oligo 合成用于测序、PCR/RT-PCR 和杂交等多种应用。同时，他们也用 MerMade 成功实现了长达 100 mer 的长 Oligo 的合成并取得了超过 99% 的耦合效率。除此之外，MerMade 的试剂消耗明显低于市场上的其他品牌。 现如今，核酸药的发展如日中天，全球的领军企业 Alnylam 可谓硕果累累，其发表的多篇文献都有用到 MerMade 的系列合成仪完成各种 Oligo 尤其是 siRNA 的合成，进行最新的核酸药的研发。 |
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