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荧光原位杂交实验（FISH）步骤详解和注意事项
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FISH检测领域，尤其是在疾病分型领域，探针大多采用直标型设计。 6，能对同一样本进行多次的FISH操作吗？ 在多数情况下，如果FISH操作没有得到正常的结果，我们可以将探针洗去，然后使用同样的探针进行再次的杂交。如果我们使用的是直标型探针，还可以使用不同探针对同一样本进行反复杂交。针对不同的样本，处理方法略有不同。 外周血样本的处理： 1、使用镊子小心地揭去杂交区的盖玻片 2、将样本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各一分钟以便充分地脱水。将片子风干后就可以进行重复的杂交了。二次杂交中建议将变性的时间缩短一半，但不得少于3分钟。如果对同一样本还要进行三次杂交，变性的时间就无需减少了。对于多次杂交，复染液浓度的降低有利于保持探针的亮度。 曾有报道在同一样本片上进行了多达8次的FISH操作。也可对已经进行G带显色的样本片进行FISH操作：将样本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各二分钟以便充分地脱水。将片子风干后就可以进行重复的杂交了。 二次杂交中建议将变性的时间缩短一半，但不得少于3分钟。如果对同一样本还要进行三次杂交，变性的时间就无需减少了。 7， FISH技术有哪些主要优势？ ① 安全、快速、灵敏度高； ② 探针能较长时间保存； ③ 多色标记，简单直观； ④ 可用于中期染色体及间期细胞的分析； ⑤ 可应用于新鲜、冷冻或石蜡包埋标本以及穿刺物和脱落细胞等多种物质的检测。 8，原位杂交技术的发展前景如何？ FISH 技术作为连接分子生物学与细胞生物学的桥梁地位已为世人所公认。 尽管目前FISH技术无法达到百分百完全杂交，特别是在应用较短cDNA探针时存在杂交效率明显下降的问题，但随着各种新型分子探针以及更为精密高端的光学显微镜和功能强大的计算机分析系统的不断问世，上述问题将会逐步得到解决，该技术的作用正变得日益重要，应用领域也得以不断扩展。FISH技术在泌尿系统肿瘤研究领域的巨大潜力与光明前景将引领我们进入全新时代。 发自小木虫Android客户端 |
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